买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：天津市农业科学院;天津农学院

摘要：本发明公开了一种利用化学诱变创制菜豆抗逆突变体的方法及应用。主要包括：羟脯氨酸（Hyp）筛选浓度的确定、甲磺酸乙酯（EMS）半致死量的确定、抗逆突变体继代培养等步骤。本发明筛选的抗逆突变体经过3‑5次继代后最终获得耐羟脯氨酸（Hyp）的菜豆子叶节31个，突变率为8.16%。本发明可以诱变并定向筛选出抗逆菜豆突变体，为菜豆抗逆育种提供材料支撑。

主权项：1.一种利用化学诱变创制菜豆抗逆突变体的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）羟脯氨酸（Hyp）筛选浓度的确定：以苗龄5-7d的菜豆子叶节为材料，选择生长状态基本一致，接种至添加不同浓度羟脯氨酸（Hyp）的再生培养基MS+2.0mgL6-BA中，Hyp浓度梯度分别为1、1.5、2、2.5、3、3.5mmolL，以不添加羟脯氨酸Hyp的不定芽再生培养基为空白对照CK组，每个处理接种10瓶，每瓶接种4个子叶节，重复3次，14d后统计子叶节死亡率，将存活下来的子叶节接种至再生培养基上，14d后统计再生培养基上子叶节的再生率；（2）EMS半致死量的确定将生长状态基本一致的子叶节，放至于100mL三角瓶中，以无菌磷酸缓冲液为溶剂，分别配置6个不同体积浓度（VV）的EMS溶液，每个三角瓶中加入50mL配置好的EMS溶液，每个处理4瓶，每瓶内放15个子叶节，重复3次；在黑暗环境下浸泡2h，后将子叶节取出放置在装有湿润无菌滤纸的培养皿上，在黑暗环境下再静置12h，将静置12h后的子叶节用无菌水冲洗3-5次，每次冲洗3min，转接至MS培养基上恢复培养3d，后再转接至再生培养基MS+2mgL6-BA上，20d后统计子叶节的死亡率及再生率；所述6个不同体积浓度（VV）的EMS溶液为：0%（对照，不添加EMS）、0.05%、0.1%、0.2%、0.4%、0.6%；（2）子叶节EMS诱变及抗逆突变体筛选采用最佳诱变剂量对菜豆子叶节进行诱变处理，将诱变后的子叶节转接至没有任何筛选压力和植物生长调节剂的MS培养基上恢复培养3d，3d后将恢复好的子叶节转接到添加了羟脯氨酸（Hyp）最佳筛选剂量的再生培养基上进行筛选，培养20d后，统计子叶节存活率和突变率；羟脯氨酸最佳筛选剂量为3.5mmolL。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津市农业科学院 天津农学院 一种利用化学诱变创制菜豆抗逆突变体的方法及应用