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申请/专利权人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司
摘要：本发明属于分子生物学技术领域，公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用，具体公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲型MS2装甲病毒样颗粒的制备方法。本发明通过分别扩增PRRSV‑1和PRRSV‑2的M基因，进行纯化回收，连接内含MS2成熟酶蛋白基因、衣壳蛋白的pET28b载体，通过转化至BL21DE3后，经IPTG诱导表达，利用PEG6000沉淀法纯化，制备得到猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲型MS2装甲病毒样颗粒，可作为核酸检测的质控品或定量标准品。
主权项：1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲型MS2装甲病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：1以PRRSV-1和PRRSV-2国家标准物质为模板，用第一引物对或第二引物对进行PCR扩增，得到第一PCR扩增产物或第二PCR扩增产物；2将所述第一PCR扩增产物、所述第二PCR扩增产物和MS2重组噬菌体载体分别使用NOTⅠ和HINDⅢ进行双酶切，依次得到第一酶切产物、第二酶切产物和第三酶切产物；3将所述第一酶切产物、所述第二酶切产物与所述第三酶切产物连接，转化至感受态细胞，得到第一重组质粒和第二重组质粒；4将所述第一重组质粒或所述第二重组质粒转化至细胞，诱导表达，即得到猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲型MS2装甲病毒样颗粒；所述第一引物对包括如SEQIDNO:1所示核苷酸序列的上游引物和如SEQIDNO:2所示核苷酸序列的下游引物；所述第二引物对包括如SEQIDNO:3所示核苷酸序列的上游引物和如SEQIDNO:4所示核苷酸序列的下游引物。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东海大畜牧兽医研究院有限公司 猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲型MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用
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