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一种提高支链氨基酸(BCAA)产量的方法及菌株构建 

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申请/专利权人:元素驱动(杭州)生物科技有限公司

摘要:本发明涉及一种提高支链氨基酸BCAA产量的方法及菌株构建,采用基因工程的方法获得基因工程菌株,所述基因工程菌株包括实质上支链氨基酸‑阳离子同向转运蛋白或支链氨基酸‑苯丙氨酸ABC转运系统活性分别或同时被减弱或消除。减弱或消除支链氨基酸‑阳离子同向转运蛋白活性的方式是敲除或突变brnQ基因或抑制brnQ基因的表达;削弱或消除支链氨基酸‑苯丙氨酸ABC转运系统活性的方法是敲除或突变livJKHMGF基因的一个或多个或抑制livJKHMGF基因一个或多个基因的表达,优选缺失livJ基因或livHM基因。所述基因工程菌株还包括实质上支链氨基酸转运蛋白外排基因ygaZH、brnEF、yjeH或leuE的增强表达。本发明还公开了利用所述菌株高产L‑缬氨酸、L‑亮氨酸和L‑异亮氨酸的方法。

主权项:1.生产支链氨基酸(BCAA)的基因工程菌株,所述基因工程菌株为大肠杆菌,所述基因工程菌株具有比野生型菌株低30%以上的从培养基吸收BCAA的能力,所述工程菌株同时缺失brnQ基因和livHM基因,或同时缺失brnQ基因和livJ基因;所述基因工程菌株还包括实质上解除了L-异亮氨酸抑制的苏氨酸脱氨酶的基因、实质上解除了L-异亮氨酸抑制的乙酰化羟基酸合成酶的基因、苏氨酸脱水酶基因、苏氨酸转运蛋白基因、乙酰羟酸异构酶基因ilvC、二羟酸脱水酶基因ilvD、支链氨基酸氨基转移酶基因ilvE以及支链氨基酸脱氢酶基因;所述基因工程菌株通过改造将碳代谢流最大化集中到丙酮酸并导向目标氨基酸;所述实质上解除了L-异亮氨酸的抑制的苏氨酸脱氨酶的基因为解除型ilvA基因;所述实质上解除了L-异亮氨酸的抑制的乙酰化羟基酸合成酶的基因为解除型ilvIH基因;所述基因工程菌株敲除了如下基因:ldhA、pta、poxB、adhE、pflB、mgsA、frdA、dadA、avtA和ilvE。

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