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申请/专利权人：江苏科技大学;镇江市粮食和物资储备质量监测中心(镇江市军粮供应管理中心)

摘要：本发明属于生物传感器及检测技术领域，涉及一种RCA‑GO适配体荧光生物传感器的制备方法，包括：先制得量子点偶联的荧光探针，再制备环状DNA模板CDT，再制得滚圈扩增的产物RCAP，将其与量子点偶联的荧光探针以体积比1:1杂交，加入GO溶液，37℃孵育后制得。本发明还将所制得的RCA‑GO适配体荧光生物传感器应用于对黄曲霉毒素B1（AFB1）和赭曲霉毒素A（OTA）进行荧光检测。本发明量子点制备成本低、偶联活性强、制备方法成熟稳定；未与目标物结合的适配体与Padlock结合形成CDT，进行滚圈扩增反应，使荧光信号大大增强，实现对AFB1和OTA的检测，理论基础成熟，可靠性好；与量子点偶联后的荧光探针信号稳定，灵敏度强，形成的双链结构（RCAPQDs‑cDNA）稳定性好，不易产生假阳性信号。

主权项：1.一种RCA-GO适配体荧光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1量子点偶联的荧光探针的制备以Tris-HCl缓冲溶液为溶剂，配制含有20mg·mL-1的EDC和10mg·mL-1的NHS的混合溶液；将2mLg-CNQDs、200µL上述EDC和NHS混合溶液混合，室温孵育1h以活化表面羧基，加入100µLcDNA1，4℃轻轻搅拌12h，10000rpm离心10min，洗涤3次，制得偶联的荧光探针g-CNQDs-cDNA1；同上步骤，制得偶联的荧光探针CdTeQDs-cDNA2；所制得的量子点偶联的荧光探针分散在2mLTris-HCl缓冲液中，4℃储存；2环状DNA模板CDT的制备将适配体Apt即Apt1与Apt2，和滚环模板Padlock即Padlock1与Padlock2，分别于95℃退火10min，65℃的水浴10min，逐渐冷却至室温；反应体系包含适配体Apt、滚环模板Padlock、T4连接酶、10×T4连接酶缓冲液和50%PEG4000缓冲液，以体积比为5~10µL:5~10μL:0.5~1μL:1~2μL:1~2μL进行混合，用去离子水配至总体积为20µL，22℃水浴孵育，65℃灭活T4连接酶，得混合物；3RCAP的制备将10µL步骤（2）的混合物加入RCA反应物中，所述RCA反应物中含有体积比为1:3:4的Phi29聚合酶、10×Phi29缓冲液和500µM的dNTPs，加去离子水使总体积为20μL，37℃孵育10h，65℃终止反应10min，以灭活Phi29聚合酶，所得的溶液是滚圈扩增的产物RCAP；4RCA-GO适配体荧光生物传感器的制备将滚圈扩增的产物RCAP分别与步骤（1）所制偶联的荧光探针以体积比1:1杂交并用去离子水补充体积至200µL，37℃水浴中反应，加入5µL200mg·mL-1的GO溶液混合，37℃孵育30min，制得RCA-GO适配体荧光生物传感器。

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权利要求：

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