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申请/专利权人：中国人民解放军陆军军医大学

摘要：本发明提供了一种血清型B型类鼻疽菌的特异性O‑抗原及其提取方法和应用，本发明提供的一种由鼠李糖、半乳糖和木糖构成的多糖抗原可作为B型血清型类鼻疽菌的诊断候选抗原以及多糖结合疫苗候选抗原方面的应用，弥补当前只有基于A型类鼻疽菌的诊断抗原和多糖结合的疫苗，导致诊断和防治范围有限，防护力度不足的问题。

主权项：1.一种血清型B型类鼻疽菌的特异性O-抗原，其特征在于，包含由[→4-α-L-Rhap1→4-α-L-Rhap1→2-α-L-Rhap1→2-α-L-Rhap1→3-α-L-Rhap1→3-α-L-Rhap1→4-α-L-Rhap1→6-α-D-Galp1→]n构成的主链，其中，Rhap的O-2或O-3位链接t-β-D-Xylp侧链，Galp的O-3位链接t-β-D-Galp侧链；所述血清型B型类鼻疽菌的特异性O-抗原的提取方法，包括：1）将血清型B型类鼻疽菌于LB液体培养基中培养增殖，然后，取菌液离心后得到菌体沉淀；2）加入浓度不低于2%的苯酚水溶液将菌体灭活，得到灭活后的菌体溶液；3）向所述灭活后的菌体溶液中加入苯酚，至苯酚终浓度为50%，然后于65℃磁力搅拌提取，得到初提混合液；4）将所述初提混合液离心，收集上清液；5）将所述上清液置于截流量为3500Mw透析袋中，透析除去苯酚，得到透析液；6）将所述透析液浓缩后冻干，得到粗提物；7）将所述粗提物复溶，然后先加入DNaseI和RNaseA使其终浓度为50μgmL，于37℃进行酶解，再加入ProteinaseK于60℃进行酶解；8）酶解处理后，冷却至室温后离心，将上清以截留分子量为3500Da的透析袋进行透析处理；9）透析完成后，回收袋内液体经浓缩、冻干即得脂多糖样品；10）将所述脂多糖样品溶于2%乙酸溶液中，至终浓度10mgmL，然后，加热处理2h，得到悬浊液；11）将所述悬浊液离心，得上清液，将所述上清液经G-10脱盐柱纯化，即得多糖组分；12）将所述多糖组分经分子筛层析，即得O-抗原纯品；所述分子筛层析是通过包括下述条件的方法实现的：以0.15MNaCl溶液为洗脱液，以流速0.15mLmin过夜洗脱，收集洗脱液，采用苯酚-硫酸法测定并绘制洗脱曲线，洗脱曲线有两个主要洗脱峰，收集后一个主要洗脱峰，透析浓缩、冻干，即得O-抗原纯品。

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