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申请/专利权人：中国科学院亚热带农业生态研究所

摘要：本发明公开了一种分离瘤胃甲烷短杆菌的方法，它包括如下步骤：（1）配制培养基溶液；（2）将培养基溶液放入丁腈厌氧瓶中磁力搅拌溶解后，抽滤，放置80‑90℃的水浴锅中，持续通入二氧化碳，至培养基的颜色呈金黄色；再将培养基溶液注入添加有琼脂粉的厌氧管中，高压灭菌后置于45℃恒温的水浴中，得琼脂培养基，备用；所述琼脂粉在培养基中的质量百分比为1.5%；将步骤（1）配制的培养基溶液高压灭菌，得非琼脂培养基；（3）取新鲜瘤胃液样品稀释后接种至琼脂培养基中，进行滚管分离，在紫外光下得到呈蓝绿色或绿松石色的甲烷短杆菌菌斑；挑取甲烷短杆菌菌斑接种至非琼脂培养基中分离纯化培养，即得纯化后的甲烷短杆菌。

主权项：1.一种分离瘤胃中甲烷短杆菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）配制培养基溶液：每1L培养基中含有KH2PO41.2-1.6g，NH42SO40.4-0.8g，KCl1.2-1.8g，NaHCO34.0-4.5g，L-cysteine·HCl·H2Ol-半胱氨酸盐酸水0.2-0.8g，MgCamix钙镁溶液15-25mL，甲酸钠、醋酸钠和甲醇的混合溶液35-45mL，澄清瘤胃液130-150mL，硫化钠-半胱氨酸还原剂3-7mL，微量元素溶液0.8-1.2mL，0.1%刃天青溶液1.8-2.2mL，酵母提取物2.0-3.0g，其余为蒸馏水；所述MgCamix钙镁溶液中钙的浓度为0.06-0.1M、镁的浓度为0.06-0.1M，所述甲酸钠、醋酸钠和甲醇的混合溶液中甲酸钠的浓度为2.8-3.2M、醋酸钠的浓度为0.8-1.2M、甲醇的浓度为0.8-1.2M，每100mL所述硫化钠-半胱氨酸还原剂中含有Na2S2.3-2.7g、半胱氨酸2.3-2.7g、无水碳酸钠0.8-1.2g、其余为水，每1L微量元素溶液中含有25%HCl8-12mL、FeCl2·4H2O1.2-1.8g、CoCl2·6H2O180-200mg、MnCl2·4H2O80-120mg、ZnCl250-90mg、H3BO34-8mg、Na2MoO4·2H2O30-40mg、NiCl2·6H2O20-30mg、CuCl2·2H2O1.8-2.2mg、其余为蒸馏水；（2）将步骤（1）配制的培养基溶液放入丁腈厌氧瓶中磁力搅拌溶解后，抽滤，放置80-90℃的水浴锅中，持续通入二氧化碳，至培养基的颜色呈金黄色；再将培养基溶液注入添加有琼脂粉的厌氧管中，高压灭菌后置于45℃恒温的水浴中，得琼脂培养基，备用；所述琼脂粉在培养基中的质量百分比为1.5%；将步骤（1）配制的培养基溶液高压灭菌，得非琼脂培养基；（3）取新鲜瘤胃液样品稀释后接种至步骤（2）所制备的琼脂培养基中，进行滚管分离，在420nm紫外光下得到呈蓝绿色或绿松石色的甲烷短杆菌菌斑；挑取甲烷短杆菌菌斑接种至步骤（2）所制备的非琼脂培养基中分离纯化培养，即得纯化后的甲烷短杆菌。

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