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申请/专利权人：上海交通大学
摘要：一种活细胞内原位自聚合水凝胶的构建及提取方法，通过构建类节肢弹性蛋白的表达载体，或重组类节肢弹性蛋白与贻贝足蛋白融合的表达载体，分别导入酪氨酸营养缺陷型表达宿主中，经过培养基中限制性底物酪氨酸和多巴的更替并提高温度后，在活细胞内合成的多巴引入重组蛋白自聚合形成原位水凝胶。本发明在模式生物大肠杆菌中将多巴引入到典型的内在无序结构蛋白中，利用多巴残基介导的多种共价和非共价交联化学反应，直接得到胞内原位自聚合蛋白水凝胶。
主权项：1.一种活细胞内原位自聚合水凝胶的构建方法，其特征在于，构建类节肢弹性蛋白的表达载体，将所述表达载体导入酪氨酸营养缺陷型表达宿主中从而得到重组表达菌株；将所述重组表达菌株接种至含有酪氨酸和抗生素的无机盐合成培养基中，于37℃条件下培养至菌体密度不再增长后继续饥饿培养2h；然后添加多巴和诱导剂，于30℃条件下诱导培养6h后菌体活细胞内生成水凝胶；其中，所述类节肢弹性蛋白由32个氨基酸序列如SeqIDNo.1所示的黑腹果蝇Drosophilamelanogaster节肢弹性蛋白保守肽段单体串联而成；所述酪氨酸营养缺陷型表达宿主通过同源重组法敲除大肠杆菌酪氨酸合成途径的tyrA基因得到；所述多巴的终浓度为0.5-4mM；所述诱导剂为异丙基硫代半乳糖苷IPTG，其终浓度为0.05-5mM。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海交通大学 活细胞内原位自聚合水凝胶的构建及提取方法
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