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申请/专利权人：成都农业科技职业学院

摘要：本发明公开了一种干酪乳杆菌及其在重金属污染土壤修复中的应用方法。本发明公开的菌株B5‑2，保藏号为CGMCCNO.29567。本发明中，培育的菌株具有很强发酵农业废弃物产有机酸的能力，可开发为生物质淋洗剂，用于淋洗去除土壤中的重金属。经振荡淋洗试验证实农业废弃物经本发明提供的菌株发酵后能有效提高其洗液去除土壤铅、镉、锌的效率。本发明提供的副干酪乳杆菌B5‑2能快速、高效地发酵农业废弃物产有机酸淋洗液，利用所述发酵液能方便快捷、绿色环保且经济高效地去除土壤中铅、镉、锌等重金属，有利于农业废弃物资源化利用和土壤重金属修复，促进农业可持续发展。

主权项：1.一种干酪乳杆菌及其在重金属污染土壤修复中的应用方法，其特征在于，所述应用方法包括以下步骤：S1：先进行产酸潜力菌株的初筛，称取约25g自然堆砌的农业废弃物于225mL灭菌生理盐水中，振荡摇匀，进行梯度稀释，取各稀释液0.1mL均匀涂布于含有2％mvCaCO3的MRS固体培养基中，将平板置于36±1℃恒温培养箱中培养48h，挑选溶钙圈明显且大小、形状、颜色差异大的单菌落，通过反复划线培养进行纯化，获得具有产酸潜力的菌株；S2：进行优良菌株复筛，通过分析菌株产酸效率及生长速率，对纯培养的菌株进行复筛，以获得发酵农业废弃物的优良菌株；S3：进行菌株活化与驯化，将获得优良菌株于MRS液体培养基中36℃下培养12h进行菌株活化；然后，按照5％中的添加量接种上述活化好的菌悬液到含有12.5g粉状农业废弃物的三角瓶中，用蒸馏水定容至250mL浓度为50gL，在36℃培养24h进行菌株驯化；S4：进行发酵废弃物淋洗液制备，按照10％的量接种上述驯化好的悬浊液分别到含有25g的菠萝皮渣、哈密瓜皮渣、玉米秸秆和米糠等四种废弃物粉末的各塑料瓶中，用蒸馏水定容至250mL，制成浓度为100gL的4种悬浊液，然后在室温条件下发酵24-48h后，将这些液体用300目的滤布过滤后，制得发酵淋洗液；S5：使用步骤S4中制得的发酵液淋洗去除土壤重金属，称取污染土壤2.00g于50mL酸浸泡过夜的塑料瓶中，按1:20的土液比加入制备好的淋洗液，将塑料瓶放入25℃恒温振荡器中，在转速为180rmin-1下进行振荡淋洗120min；随后将淋洗液转移至50mL离心管中以3500rmin-1离心10min，将上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，之后即可结束整个干酪乳杆菌及其在重金属污染土壤修复中的应用流程。

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