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申请/专利权人：铭诚惠众(江苏)药物研究有限公司
摘要：本发明公开了一种半重组表达合成比伐卢定的方法，属于多肽药物制备方法技术领域，其主要的步骤包括：首先将带有比伐卢定前体肽串联表达基因的质粒利用基因重组技术导入到大肠杆菌EscherichiacoliBL21DE3中，构建重组工程菌，经过高密度发酵并诱导后获得表达比伐卢定前体肽的串联表达蛋白，后经过溶解、过滤、酶切、纯化等步骤后得到比伐卢定前体。再经过化学合成Boc‑D‑Phe‑OSU，并与比伐卢定前体反应，得到带Boc保护的比伐卢定粗产物，最后通过水解和纯化得到比伐卢定精肽。本发明采用基因重组技术，与现有的化学合成法相比，减少了杂质的产生，纯度和收率相对较高，且不使用剧毒试剂，更安全。本发明产率高，成本低，适合大规模生产。
主权项：1.一种半重组表达合成比伐卢定的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：设计比伐卢定前导肽以及前体肽的串联蛋白序列，构建相应的表达质粒，转入宿主菌表达，获得比伐卢定的前体肽，该前体肽的氨基酸序列对应比伐卢定人工合成的二十肽序列的第2-20位氨基酸序列；S2：使用Boc-D-Phe-OSU对所述前体肽的1位添加一个带Boc保护的非天然氨基酸D-Phe，得到带Boc保护的比伐卢定；S3：带Boc保护的比伐卢定在三氟乙酸条件下水解去Boc保护，得到比伐卢定。
全文数据：
权利要求：
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