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申请/专利权人：南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心)

摘要：本发明提供了一种基于Cas13的非核酸扩增检测RNA的方法、试剂盒和应用，涉及生物技术领域。该方法的反应体系包括Cas13蛋白、crRNA、茎环DNA、DS1、DS2、燃料链、RNA报告分子和金属离子。当存在目的RNA时，Cas13蛋白切割茎环DNA释放能够置换出DS1中DS1‑b的茎环单链B，DS1‑b进一步置换出DS2中的能够切割RNA报告分子的DNAzyme，同时燃料链置换出中间体ID中的茎环单链B使其继续参加反应，达到放大信号的目的。该检测方法具有检测快速，检测条件简单，无需复杂精密设备的优势。

主权项：1.一种基于Cas13的非核酸扩增检测RNA的方法，其特征在于，反应体系包括Cas13蛋白、crRNA、茎环DNA、DS1、DS2、燃料链、RNA报告分子和金属离子；所述crRNA靶向目标RNA；所述茎环DNA由单链DNA折叠构成，所述茎环DNA一侧的环结构靠近茎结构位置存在至少两个尿嘧啶核糖核苷酸；尿嘧啶核糖核苷酸将所述茎环DNA分隔为茎环单链A和茎环单链B两部分；DS1为双链DNA，由互补的DS1-t和DS1-b通过互补配对构成，所述DS1存在由DS1-t构成的单链DNA段DS1A，所述茎环单链B与所述单链DNA段DS1A至少部分互补配对；燃料链为单链DNA，所述燃料链与所述DS1-t的部分互补配对；部分互补配对位置不位于所述单链DNA段DS1A，所述部分互补配对位置的DNA不与所述茎环单链B结合；DS2为双链DNA，由互补的DNAzyme和blocker通过互补配对构成，所述DS2存在由blocker构成的单链DNA段DS2A，所述DS1-b与所述单链DNA段DS2A至少部分互补配对；所述RNA报告分子为单链RNA，修饰有发光基团和淬灭基团；所述DNAzyme的结合臂与所述RNA报告分子互补配对；所述检测方法包括：当目的RNA存在时，Cas13蛋白在crRNA的引导下与目的RNA结合，切割所述反应体系中茎环DNA使所述茎环DNA分隔为茎环单链A和茎环单链B两部分；所述茎环单链B与所述DS1发生链置换反应，得到单链DNA状态的DS1-b和由茎环单链B和DS1-t结合的中间体ID；所述燃料链与所述中间体ID发生链置换反应，得到单链DNA状态的茎环单链B，所得到单链DNA状态的茎环单链B，并在所述燃料链存在下不断与DS1发生链置换反应；所述单链DNA状态的DS1-b和所述DS2发生链置换反应，得到单链DNA状态的DNAzyme，DNAzyme在金属离子存在时切割所述RNA报告分子，使所述反应体系中释放荧光信号。

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权利要求：

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