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申请/专利权人：深圳华大基因科技服务有限公司

摘要：本发明涉及一种制备单链长探针的方法、去除核糖体RNA的方法和试剂盒。该制备单链长探针的方法包括通过反转录获得cDNA样本，所述cDNA样本包含核糖体RNA的反转录产物；利用引物对cDNA样本进行特异性扩增，获得扩增产物，所述引物能够特异性靶向所述核糖体RNA的反转录产物，所述扩增产物包括互补的两条链；去除扩增产物中的一条链，获得所述单链长探针；所述引物包括第一引物和第二引物，第一引物5’端携带有磷酸化修饰，第二引物上含有至少一个硫代修饰。所获得的单链长探针可以用于去除核糖体RNA，可以应用于多种物种中RNA样本中核糖体RNA的去除，方便简单，且核糖体RNA的残留率低。

主权项：1.一种去除RNA样本中的核糖体RNA的方法，其特征在于，包括：将所述RNA样本和单链长探针混合，使得所述单链长探针与所述RNA样本中的核糖体RNA杂交，以便获得第一产物，所述第一产物中含有核糖体RNA-单链长探针杂交产物，所述单链长探针为根据下述方法制备的单链长探针，包括：通过反转录获得cDNA样本，所述cDNA样本包含核糖体RNA的反转录产物；基于所述cDNA样本，利用引物对所述cDNA样本进行特异性扩增，以便获得扩增产物，所述引物能够特异性靶向所述核糖体RNA保守区域的反转录产物，所述扩增产物包括互补的两条链，所述核糖体RNA保守区域包括18SrRNA、28SrRNA；利用核酸外切酶对所述扩增产物进行消化处理，去除所述扩增产物中的一条链，以便获得所述单链长探针，所述核酸外切酶为lambda核酸外切酶；其中，利用SEQIDNO:1和SEQIDNO:22所示引物反转录获得cDNA；利用SEQIDNO:1~SEQIDNO:24所示引物对所述cDNA样本进行特异性扩增，SEQIDNO:1~SEQIDNO:12中5’端带有磷酸化修饰，SEQIDNO:13~SEQIDNO:24的各序列5’端带有封闭基团，且靠近5’端含有3-5个连续的硫代修饰，SEQIDNO:1~SEQIDNO:24中Y指的是碱基类型为T或C，K指的是碱基类型为G或T，R指的是碱基类型为G或A，M指的是碱基类型为A或C，S指的是碱基类型为G或C；利用核糖核酸酶去除所述第一产物中的核糖体RNA，以便获得第二产物，所述核糖核酸酶为RNaseH酶；利用脱氧核糖核酸酶去除所述第二产物中的所述单链长探针，以便获得第三产物，所述脱氧核糖核酸酶为DNaseI酶；所述RNA样本为总RNA。

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