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申请/专利权人：海南热带海洋学院崖州湾创新研究院;海南热带海洋学院

摘要：一种检测海洋生物体内微塑料含量的高通量方法，本发明涉及环境污染物检测领域，具体涉及一种检测海洋生物体内微塑料含量的高通量方法。本发明要解决现有方法不能快速、高效且准确检测海洋生物中微塑料含量的问题。方法：一、实验动物驯化；二、微塑料暴露实验；三、组织采集；四、组织消解；五、建立标准曲线；六、微塑料含量测定。本发明能够快速、高效且准确检测海洋生物中微塑料含量。本发明用于检测海洋生物中微塑料含量。

主权项：1.一种检测海洋生物体内微塑料含量的高通量方法，其特征在于该方法具体按以下步骤进行：步骤一：实验动物驯化配制海水溶液，以海洋双壳贝类为受试动物，在海水溶液中进行暂养驯化，控制温度为25±1℃，盐度30±1‰；步骤二：微塑料暴露实验将步骤一驯化后的受试动物随机分组，分为空白对照组和暴露组，空白对照组采用步骤一配制的海水溶液进行饲养；暴露组采用含荧光标记微塑料颗粒的海水溶液饲养，进行微塑料暴露实验，控制微塑料颗粒浓度为100～500μgL；步骤三：组织采集将步骤二实验后的受试动物进行目标组织器官采集，然后称重，冷冻保存；步骤四：组织消解采用复合消解试剂对步骤三采集的目标组织器官进行恒温振荡消解，然后定容，获得待测样品溶液；步骤五：建立标准曲线配制一系列不同浓度梯度的荧光微塑料溶液，依次加入到96孔酶标板中，采用多功能酶标仪设置激发波长和发射波长，重复测定样品荧光强度三次，建立微塑料浓度和对应荧光强度的标准曲线；步骤六：微塑料含量测定将步骤四中的待测样品溶液依次加入96孔酶标板中，采用步骤五中多功能酶标仪设置同样的激发和发射波长，重复测定待测样品溶液荧光强度三次，并根据步骤五建立的标准曲线计算待测样品溶液中微塑料浓度；根据步骤三中目标组织器官重量和步骤四中定容体积，计算单位质量组织中微塑料的含量；然后扣除空白对照组的背景值，得到海洋生物体内微塑料含量，完成；步骤一所述暂养驯化时间为2～3周；步骤一在暂养驯化期间采用0.45μm微孔滤膜对海水溶液进行过滤；步骤四所述复合消解试剂为氢氧化钾溶液和过氧化氢溶液；步骤四所述消解工艺为每个样品中加入8mL质量浓度为10％的氢氧化钾溶液，放入恒温摇床中，控制温度为65℃、转速为80rpm，消解12h，再向每个样品中加入2mL质量浓度为30％的过氧化氢溶液，控制温度为65℃、转速为80rpm，继续消解12h。

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