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一种基于酶调控纳米颗粒自组装的微流控磁弛豫传感检测方法 

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申请/专利权人:扬州大学

摘要:本发明公开了微流控体外诊断技术领域内的一种基于酶调控纳米颗粒自组装的微流控磁弛豫传感检测方法,包括以下步骤:将待测靶标的捕获抗体与表面羧基修饰的磁珠偶联;将待测靶标的检测抗体、过氧化氢酶和官能团活化的聚苯乙烯微球三者偶联;将偶联有捕获抗体的磁珠、偶联有过氧化氢酶与检测抗体的聚苯乙烯微球和待测靶标三者通过惯性蛇形微流控芯片混合;免疫反应后,磁分离洗涤,加入过氧化氢溶液与免疫复合物发生酶催化反应;再将反应液中剩余的过氧化氢与银氨溶液稀释的磁性纳米颗粒混合,得到银‑磁纳米颗粒探针,以上反应同样在微流控芯片中进行;测量银‑磁纳米颗粒探针的横向弛豫时间变化值;使用本发明实现全血中痕量靶标的快速定量检测。

主权项:1.一种基于酶调控纳米颗粒自组装的微流控磁弛豫传感检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将待测靶标的捕获抗体与表面羧基修饰的磁珠反应,得到偶联有捕获抗体的磁珠;(2)将待测靶标的检测抗体、过氧化氢酶和官能团活化的聚苯乙烯微球反应,得到检测抗体和酶修饰的聚苯乙烯微球偶联物;(3)将氨水溶液滴加到硝酸银溶液中至澄清,加入氢氧化钾溶液,再滴加氨水溶液至澄清,然后加水溶液定容,最后加入磁性纳米颗,得到银氨溶液稀释的磁性纳米颗粒;(4)将偶联有捕获抗体的磁珠、偶联有过氧化氢酶与检测抗体的聚苯乙烯微球和待测靶标三者通过惯性蛇形微流控芯片混合,形成三明治免疫复合物;免疫反应一定时间后,检测芯片内的磁铁将富集磁性的免疫复合物,磁分离洗涤,分离掉不带磁性的颗粒;(5)将过氧化氢溶液与带有酶的免疫复合物发生酶催化反应,待反应一定时间后,将反应液中剩余的过氧化氢与银氨溶液稀释的磁性纳米颗粒混合,得到自主装的银-磁纳米颗粒探针;(6)取检测芯片中反应池内的混合物溶液,通过核磁共振波谱仪测量以获得横向弛豫时间变化值ΔT2;所述检测芯片包括通道层芯片本体和基底层芯片本体,所述基底层芯片本体紧密贴合在通道层芯片本体下侧,所述通道层芯片本体上开有至少三个进液口一,所述通道层芯片本体朝下的一端设有微流体通道、至少一个蛇形通道、反应池和废液池,所述微流体通道的一端与三个进液口一相通,最前面的所述蛇形通道一端和微流体通道的另一端相接,最后面的蛇形通道末端的通道芯片本体上设有收集池,所述通道层芯片本体上开有上阀孔,所述反应池远离蛇形通道的一端与上阀孔连通,所述收集池经上阀孔与反应池连通,收集池经上阀孔还与废液池连通,通道层芯片本体上还开有进液口二,所述进液口二经上阀孔与收集池连通,所述基底层芯片本体朝下的一端设有用于放置磁铁且与收集池所在位置对应的安置槽,所述检测芯片还包括压力阀体,所述基底层芯片本体上开有与上阀孔位置对应的下阀孔,所述压力阀体依次经上阀孔和下阀孔分别与通道层芯片本体和基底层芯片本体连接,所述压力阀体上开有从上往下依次设置的流通通道一、流通通道二和流通通道三,所述收集池经流通通道三与废液池连通,所述收集池经流通通道二与进液口二连通,所述收集池经流通通道一与反应池连通。

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权利要求:

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