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申请/专利权人：通化安睿特生物制药股份有限公司
摘要：本发明提供了一种制备高表达且低O‑糖基化水平的重组人白蛋白的方法，包括在发酵过程中至少采取一种措施提高蛋白表达速率、降低蛋白的O‑糖基化水平；具体包括S1、种子液制备；S2、分批发酵：将BSM培养基投入发酵罐，调节pH至5.0‑5.8、灭菌，待冷却后校正溶氧，设置温度28‑29.5℃和通气量，向培养基中加入已除菌的PTM1溶液，并再次调节培养基pH至5.0‑5.8；S3、甘油补料发酵：匀速流加甘油补料，发酵至30h以上；S4、甲醇补料发酵：流加甲醇补料，罐内PH值维持5.8‑6.0，温度降至24‑28℃，保持溶氧20％以上；S5、发酵产物离心，收集上清；本发明的方法可提供蛋白表达水平、减少蛋白O‑糖基化，所表达的重组蛋白含有极低水平的糖基化修饰。
主权项：1.一种制备高表达且低O-糖基化水平的重组人白蛋白的方法，其特征在于，所述方法为通过提高蛋白表达速率，进而降低重组人白蛋白的O-糖基化水平，包括以下步骤：S1、种子液制备：取保存菌种进行平板划线，挑取单菌落接种于YPD液体培养基中28-29.5℃培养，待摇瓶种子OD600达到10-12时，作为上罐用种子液；S2、分批发酵：将BSM培养基投入发酵罐，调节pH至5.0-5.8、灭菌，待冷却后校正溶氧，设置温度28-29.5℃和通气量，向培养基中加入已除菌的PTM1溶液，并再次调节培养基pH至5.0-5.8；通过取样口将发酵罐内培养基弃掉部分，将摇瓶种子接入发酵罐，校正溶氧、设置转速，发酵期间通过调整转数和通气量维持溶氧20％以上；S3、甘油补料发酵：当溶氧突增时进入甘油补料阶段，匀速流加甘油补料，发酵至30h以上，停止补加甘油；S4、甲醇补料发酵：不添加任何碳源，以保证甘油完全耗尽；饥饿处理后，流加甲醇补料，罐内PH值维持5.8-6.0，温度降至24-28℃，实时监测各发酵参数，保持溶氧20％以上；S5、发酵结束，放罐，发酵产物离心，收集上清；步骤S1的菌种为CBS7435-rHSA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 通化安睿特生物制药股份有限公司 制备高表达且低O-糖基化水平的重组人白蛋白的方法
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