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申请/专利权人：布罗德研究所股份有限公司;哈佛大学的校长及成员们

摘要：本公开提供了用于对靶DNA分子如，基因组进行引导编辑的组合物和方法，所述引导编辑使得能够掺入核苷酸变化和或靶向诱变。核苷酸变化可包括单核苷酸变化如，任何转换或任何颠换、一个或多个核苷酸插入或者一个或多个核苷酸缺失。更具体地，本公开提供了包含核酸可编程DNA结合蛋白napDNAbp和聚合酶如，逆转录酶的融合蛋白，其由经修饰的向导RNA被称为PEgRNA引导至特定DNA序列。PEgRNA相对于标准向导RNA已改变为包含延伸部分，该延伸部分提供编码单链DNA瓣的DNA合成模板序列，其与待编辑的靶向内源性DNA序列的链同源但包含期望的一个或多个核苷酸变化，并且在被聚合酶如，逆转录酶合成之后掺入靶DNA分子中。本文还公开了利用引导编辑的各种方法，包括治疗三核苷酸重复缩减疾病、安装靶向肽标签、通过安装保护突变来治疗朊病毒病、操纵RNA编码基因以安装用于控制RNA功能和表达的RNA标签，使用引导编辑构建复杂的基因文库，使用引导编辑将免疫表位插入蛋白，使用引导编辑将可诱导的二聚化结构域插入蛋白靶标，以及递送方法等。

主权项：1.在包含靶链和非靶链的双链靶DNA序列中安装期望的核苷酸变化的方法，所述方法包括：使所述双链靶DNA序列与包含融合蛋白和引导编辑向导RNAPEgRNA的复合物接触，其中所述融合蛋白包含核酸可编程DNA结合蛋白napDNAbp和逆转录酶，其中所述napDNAbp是Cas9切口酶nCas9，并且其中所述PEgRNA包含：a间隔区序列，其能够与靶DNA的靶链退火，b延伸臂，其在5’至3’方向上包含含有期望的核苷酸变化的DNA合成模板和引物结合位点；和cgRNA核心，其与napDNAbp结合；从而对所述靶DNA序列的非靶链产生切口，由此产生具有3’末端和5’内源性DNA瓣的游离单链DNA；从而使所述游离单链DNA的3’末端与所述引物结合位点杂交，由此引发所述逆转录酶；从而从与所述引物结合位点杂交的3’末端聚合DNA链，由此产生包含期望的核苷酸变化且与所述DNA合成模板互补的单链DNA瓣；从而用所述单链DNA瓣替换5’内源性DNA瓣，由此在所述双链DNA序列中安装所述期望的核苷酸变化。

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百度查询： 布罗德研究所股份有限公司 哈佛大学的校长及成员们 编辑核苷酸序列的方法和组合物