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申请/专利权人：吉林农业大学;吉林大学

摘要：本发明公开了一种利用拉曼光谱间接测定黄粉虫幼虫蛋白质和甲壳素含量的方法及应用。首先制备干燥样品，脱脂获得脱脂样品、脱盐获得甲壳素提取物，利用拉曼光谱测定黄粉虫幼虫脱脂样品和甲壳素提取物在3470‑3480cm‑1的峰高，通过氮含量的比例结合公式可以间接计算蛋白质的含量。本发明相比凯氏定氮法，拉曼光谱测试过程具有样品用量小，灵敏度高，检出限低的特点，同时本发明所利用的拉曼光谱还可以获取黄粉虫脱脂产物和甲壳素提取物等多组分物质分子振动的光谱信息，一次性准确区分蛋白质和甲壳素，使测定结果更加准确。计算过程只与N‑H振动在3470‑3480cm‑1处产生的拉曼峰的强度相关，排除了非蛋白质氮振动峰的干扰，计算方法更加简便。

主权项：1.一种利用拉曼光谱间接测定黄粉虫幼虫蛋白质和甲壳素含量的方法及应用，其特征在于，包括以下步骤，S1、黄粉虫幼虫干燥样品的制备；取适量黄粉虫幼虫，粉碎后进行烘干1-4h至恒重，记录质量m0；S2、黄粉虫幼虫脱脂样品的制备；取干燥的黄粉虫幼虫虫体粉末，以正己烷为溶剂，采用索氏抽提法1h-2h后，进行烘干至恒重，获得黄粉虫幼虫脱脂样品；S3、黄粉虫幼虫甲壳素提取物样品的制备，记录质量m1；将黄粉虫幼虫脱脂样品放入适量1-4molLNaOH溶液中加热搅拌120min后以10000rmp离心30min，去离子水洗涤收集沉淀物，重复1-4molLNaOH溶液加热搅拌洗涤，至沉淀物上清液呈现中性；收集沉淀物进行烘干1-4h至恒重，获得脱蛋白质产物；向脱蛋白质产物中加入适量0.1-0.5molL的HCl溶液，在60℃加热搅拌离心后收集沉淀物并使用去离子水洗涤，后以10000rmp离心30min，继续去离子水洗涤直至上清液呈现中性，将剩余产物进行烘干1-4h至恒重，获得脱盐产物；向脱盐产物中加入适量1-10％H2O2溶液加热搅拌，后以10000rmp离心30min，沉淀物用去离子水洗涤脱色素，进行烘干1-4h至恒重，获得黄粉虫幼虫甲壳素提取物，并记录黄粉虫幼虫甲壳素提取物的质量m2；S4、蛋白质、甲壳素N-H振动拉曼峰高测定；取步骤S2中制得的黄粉虫幼虫脱脂样品和步骤S3中制得的黄粉虫幼虫甲壳素提取物，分别使用拉曼光谱，在632.8nm激发光下，积分次数为10次，记录其在3470-3480cm-1处的峰高的数值，黄粉虫幼虫脱脂样品峰高记为I1，黄粉虫幼虫甲壳素提取物记为I2，同时记录仪器基线空白峰高的数值I0；S5、计算脱脂产物含量；S6、计算甲壳素提取物含量；S7、计算蛋白质含量。

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