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申请/专利权人：深圳中检联检测有限公司

摘要：一种快速检测粮食中重金属铅离子的免疫学方法属于免疫学检测领域，该方法包括以下步骤：1取载体蛋白、双功能鳌合剂、PbNO32及三乙胺，于HEPES缓冲溶液中溶解，用超滤或透析的方法去除未反应的低分子物质，剩余物于HEPES缓冲溶液中保存，分装；2将铅离子完全抗原包被于酶标板微孔内，接着用质量百分比为3％的BSA封闭，在37℃孵育，用PBST溶液洗涤得到包被好完全抗原并封闭的ELISA酶标板；3将铅离子完全抗原包被于酶标板微孔内封闭，再加入待检样品，PBST溶液洗涤，再加入抗铅单克隆抗体；再用PBST溶液洗涤，加入酶标记的羊抗鼠IgG，孵育后用PBST溶液洗涤，再加入底物进行显色反应，根据显色的深浅对样品中铅离子含量进行定性和半定量分析。

主权项：1.一种快速检测粮食中重金属铅离子的免疫学方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）铅离子完全抗原的制备：取4.5～10.0mg重量份载体蛋白、0.8～1.8mg重量份双功能鳌合剂、0.7～0.8mg重量份PbNO32及1.4～4.5mg重量份三乙胺，于1～3ml体积份的HEPES缓冲溶液中溶解，15～30℃温度下振荡8～24h后，用超滤或透析的方法去除未反应的低分子物质，剩余物于HEPES缓冲溶液中保存，分装，得到铅离子完全抗原；（2）包被好完全抗原并封闭的ELISA酶标板的制备：将步骤（1）所得的铅离子完全抗原包被于酶标板微孔内,铅离子完全抗原的加入量为100ngwell；接着用质量百分比为3%的BSA封闭，在37℃孵育1～5h，于吸水纸上拍干，用PBST溶液洗涤3次得到包被好完全抗原并封闭的ELISA酶标板；其中PBST的制备是由0.01M、pH值为7.4的PBS缓冲液与Tween-20按体积比1000:0.5混合得到；（3）免疫学检测：将铅离子完全抗原包被于酶标板微孔内，接着封闭，再加入待检样品，于37℃反应至少5min，PBST溶液洗涤，再加入抗铅单克隆抗体，每孔加入100～500ng，于37℃孵育至少30min；再用PBST溶液洗涤，加入酶标记的羊抗鼠IgG，加入量为每孔10～14.5ngwe1l，于37℃孵育至少30min后用PBST溶液洗涤，再加入底物进行显色反应，根据显色的深浅对样品中铅离子含量进行定性和半定量分析。

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