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申请/专利权人：禾丰食品股份有限公司

摘要：本发明提供了一种检测鱼粉中三种生物胺的茚三酮柱后衍生化法，包括：待测样品溶液制备、标准曲线建立、利用氨基酸自动分析仪检测。本发明利用柱后衍生法，通过设定缓冲溶液种类、PH值以及相关参数对鱼粉中三种生物胺含量进行检测，相比现有技术中的柱前衍生法，前处理操作简单，检测耗时短，重复性好，具有良好的推广前景。

主权项：1.一种检测鱼粉中三种生物胺含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：1将鱼粉样品粉碎后，冷冻保存；2样品溶液制备：将步骤1中粉碎后样品溶于盐酸溶液，搅拌后取上清液加入一级水定容；摇匀后过0.22μm微孔滤膜，即得待测的样品溶液；3样品溶液检测：将步骤2所得样品溶液利用氨基酸自动分析仪分析；4标准曲线建立：采用外标法，以生物胺标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；5结果判定：根据上述步骤获得待测样品的生物胺峰面积，带入标准曲线计算得到样品溶液生物胺浓度c，通过下述计算公式计算得到待测样品中的生物胺含量， 其中，X—样品中生物胺的含量，mgkg；c—样品溶液中生物胺的浓度，μgmL；V—样品溶液的体积，mL；n—稀释倍数；m—样品的质量，g；所述盐酸溶液浓度为0.1molL；所述搅拌时间为10～30min；所述步骤3中，氨基酸自动分析仪的色谱条件为：阳离子分离柱，30mm×4.6mm，进样体积50μL，柱温70℃；紫外检测器波长570nm；反应器温度140℃；衍生剂为茚三酮溶液，所述茚三酮溶液的流速为0.25mLmin；流动相为钾盐缓冲溶液，等度洗脱，流速为0.45mLmin；所述钾盐缓冲溶液包括缓冲液A和缓冲液B；再生液D流速为0.45mLmin；所述阳离子分离柱为CationSeparationColumnLCAK17K；所述等度洗脱为：0～12.0min，缓冲液A：30％，缓冲液B：70％，再生液D：0％；12.1～17.0min，缓冲液A：0％，缓冲液B：0％，再生液D：100％；17.1～28.0min，缓冲液A：30％，缓冲液B：70％，再生液D：0％；所述缓冲液A的配制为：无水氢氧化钾11.2g，无水柠檬酸14.0g，无水氯化钾14.9g，辛酸0.1mL，一级水定容1000mL；所述缓冲液B的配制为：无水氢氧化钾16.8g，无水柠檬酸16.0g，硼酸10.0g，无水氯化钾164.0g，辛酸0.1mL，一级水定容1000mL；所述茚三酮溶液的配制为：茚三酮40g，苯酚4g，抗坏血酸0.4g，甲醇1200mL，缓冲液800mL，混合均匀；所述缓冲液的配制为：196.0g醋酸钾，272.0g三水乙酸钠，200mL乙酸，用一级水定容1000mL；所述再生液D的配制为：无水氢氧化钾33.7g，EDTA0.2g，一级水定容至1000mL；所述缓冲液A的pH值为5.45-5.50，所述缓冲液B的pH值为7.80-7.84。

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