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申请/专利权人：南京海纳医药科技股份有限公司;南京海纳制药有限公司;南京一诺医药科技有限公司

摘要：本发明涉及一种HPLC‑MSMS联用检测人血浆中吡仑帕奈的方法，属于生物分析领域，它包括以下步骤：1人血浆样品前处理；2液相色谱‑质谱联用检测；3人血浆中吡仑帕奈的测定。采用本发明的检测方法，在血浆样品进行预处理时以吡仑帕奈‑d5作为内标，采用ZORBAXEclipseXDB‑Phenyl作为色谱柱进行梯度洗脱，样品配制简单，分析时间短，对检测设备要求低，具有检测所需血浆量少，重现性好、灵敏度高、分析速度快、基质效应影响小等优点，有利于药物的临床监测和吡仑帕奈的药代动力学及生物等效性研究。

主权项：1.一种HPLC-MSMS联用检测人血浆中吡仑帕奈的方法，其特征在于，它包括以下步骤：（1）人血浆样品前处理；（2）液相色谱-质谱联用检测，色谱柱采用ZORBAXEclipseXDB-Phenyl，所述色谱柱的长度为75mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.5µm；采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为乙腈-水混合溶液，在混合溶液中乙腈与水的体积比为95:5；所述流动相B为包含0.1%甲酸的5mM甲酸铵水溶液；（3）人血浆中吡仑帕奈的测定；所述梯度洗脱过程如下：在0-0.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为55:45；在0.5-2.3分钟内，流动相A和流动相B的体积比由55:45匀速渐变至75:25；在2.3-3.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为75:25；在3.5-4.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由75:25匀速渐变至55:45；在4.0-4.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为55:45；柱温为35~45℃；流速为0.5~1.0mLmin；质谱条件包括：采用电喷雾离子源，正离子多反应监测扫描，喷雾电压5500V，离子源温度550℃；吡仑帕奈，[M+H]+，mz350.2→247，DP值100V，CE值36V；吡仑帕奈-d5，[M+H]+，mz355.0→248.2，DP值135V，CE值31V；其中，在步骤（1）中，人血浆样品前处理包括：取50μL人血浆样品，向其中加入50μL内标工作液和350µL乙腈，震荡及离心后取上清液，再与100μL复溶液混合后，即得待测样品；所述复溶液为乙腈和水的混合溶液，在所述混合溶液中乙腈和水的体积比为50:50；内标工作液的配制过程如下：称取吡仑帕奈-d5对照品，采用乙腈溶解并稀释得到浓度为1.00mgml吡仑帕奈-d5的储备液，再将所得储备液用体积比为50:50的甲醇与水混合溶液稀释得到浓度为100ngmL的内标工作液；所述震荡及离心的条件为：以2000rpmmin涡旋震荡10min后，在4℃条件下以4000rpmmin速度离心10min；将待测样品置于自动进样器，进行HPLC-MSMS分析，进样体积为5μL，进样器温度为5℃。

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