买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：中国医学科学院医学生物学研究所

摘要：本发明提供了一种IFN‑γ重组修饰的细菌囊泡及其制备方法和应用，基于IFN‑γ对APCs的高效激活作用以及BBV作为疫苗递送的优良载体的特性，提出了一种整合肿瘤抗原与免疫刺激分子共递送的策略：1利用大肠杆菌溶细胞素ACytolysinA,ClyA牵引蛋白将IFN‑γ呈递到大肠杆菌表面，制备工程细菌囊泡BBVIFN‑γ；2通过硫氧还蛋白Thioredoxin,Trx将肿瘤抗原荷载于大肠杆菌的周质空间，制备肿瘤疫苗。IFN‑γ与肿瘤抗原修饰的BBV能够实现肿瘤抗原与免疫刺激分子共递送，高效诱导DCs的激活和迁移，并且能够有效诱导抗原特异性CD4+Th1和CD8+CTL偏向性的细胞免疫应答，具有突破免疫抑制、激发有效抗肿瘤免疫应答的潜力。本发明将为肿瘤免疫治疗药物和肿瘤特异性抗原的递送提供参考。

主权项：1.一种IFN-γ重组修饰的细菌囊泡的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：步骤1，构建融合质粒：首先去除小鼠IFN-γ的信号肽，而后通过Linker将成熟的IFN-γ区域连接到ClyA的C端，并根据大肠杆菌的密码子偏好进行密码子优化，得到ClyA-IFN-γ融合基因；将肿瘤特异性抗原通过Linker连接到Trx的C端，并根据大肠杆菌的密码子偏好进行密码子优化，得到Trx-抗原融合基因；最后将ClyA-IFN-γ和Trx-抗原融合基因构建到质粒上，得到ClyA-IFN-γ+Trx-抗原融合质粒；所述肿瘤特异性抗原为：HPV特异性抗原E7，或4T1乳腺癌特异性抗原肽Zfp142+M25+Wdr33；当肿瘤特异性抗原为HPV特异性抗原E7时，经密码子优化的Trx-抗原融合基因为Trx-E7融合基因，其序列如SEQIDNO.1所示；或，当肿瘤特异性抗原为Zfp142+M25+Wdr33时，经密码子优化的Trx-抗原融合基因为Trx-Zfp142+M25+Wdr33融合基因，其序列如SEQIDNO.2所示；步骤2，细菌囊泡的制备：将步骤1所得的ClyA-IFN-γ+Trx-抗原融合质粒转化到大肠杆菌中，并通过向培养基中加入IPTG诱导外源蛋白表达，收集菌液并重悬后得到细菌悬液，通过高压均质处理所述细菌悬液，细菌经超高压强的驱动、挤过裂缝，形成携带重组蛋白的膜成分，高压均质处理后得到的细菌悬液通过初步离心收集上清液、去除破碎的菌体，上清液经超速离心收集沉淀，从而获得BBVIFN-γ+E7或BBVIFN-γ+Zfp142+M25+Wdr33，即为IFN-γ重组修饰的细菌囊泡。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国医学科学院医学生物学研究所 一种IFN-γ重组修饰的细菌囊泡及其制备方法和应用