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申请/专利权人：中南林业科技大学
摘要：本发明公开了一种油茶胚性愈伤组织原生质体分离与体细胞杂交的方法，属于植物生物技术领域。本发明方法包括以下步骤：将油茶胚性愈伤组织进行0～48h黑暗预处理，真空气压负0.09～0MPa下抽真空0～15min，加入含纤维素酶R‑10、离析酶R‑10的酶液进行酶解；酶解后的溶液过滤后离心去上清，用W缓冲液对原生质体进行清洗和重悬，静置去上清，得到油茶胚性愈伤组织原生质体；将油茶胚性愈伤组织原生质体和油茶叶肉原生质体调整为两种原生质体数量相同的混合液，加入等体积的融合剂，诱导原生质体融合。通过本发明获得的原生质体产量达3.16×106个g·FW、活力高达93％以上，原生质体融合率达13.81％。
主权项：1.一种油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于，包括以下步骤：1对油茶胚性愈伤组织进行0～48h黑暗预处理后，采集透亮的油茶胚性愈伤组织；2将步骤1采集的胚性愈伤组织切成细丝加入到含EME培养基的无菌培养皿中，真空气压负0.09～0MPa下抽真空0～15min，然后加入酶液；无菌培养皿用封口膜封口后酶解3～8h；所述的酶液包含5～15gL纤维素酶R-10、2.5～10gL离析酶R-10；3将步骤2酶解后的溶液通过无菌筛过滤，除去未酶解的胚性愈伤组织以及破裂细胞等杂质；滤液离心后去上清，用W缓冲液对原生质体进行清洗和重悬，静置待原生质体沉淀后，吸去上清，得到纯净的原生质体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中南林业科技大学 一种油茶胚性愈伤组织原生质体分离与体细胞杂交的方法
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