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申请/专利权人：涌源合生科技(深圳)有限公司
摘要：本申请提供了一种目标双链DNA的合成方法。包括：对目标双链DNA的中级组成片段进行若干轮扩增，直至符合目标双链DNA的长度要求，得到目标双链DNA；扩增步骤包括：采用特定引物对上一轮扩增完成的中级组成片段进行聚合酶链式反应扩增，得到特异双链DNA；其中，特定引物中含有限制性内切酶的识别片段；采用限制性内切酶在识别片段之外对特异双链DNA进行切割，得到至少一端形成粘性单链末端的粘性双链DNA；对粘性双链DNA进行退火处理，使粘性双链DNA通过粘性单链末端两两连接，得到当前轮扩增完成的中级组成片段。通过将目标DNA分解为中级组成片段并通过特定方法进行组装，提高了目标DNA合成的成功率和准确性。
主权项：1.一种目标双链DNA的合成方法，其特征在于，包括：对一组碱基序列互补的单链组成片段进行退火处理，得到初级组成片段，其中，所述单链组成片段包括单链子片段和连接在所述单链子片段两端的限制性内切酶的识别片段；对所述初级组成片段进行若干轮组装，直至符合第一长度要求，得到中级组成片段；其中，所述组装步骤包括：将上一轮组装完成的所述初级组成片段两两转化到载体中，并采用限制性内切酶和DNA连接酶对组装有所述初级组成片段的所述载体进行切割和连接，得到当前轮组装完成的初级组成片段；其中，所述限制性内切酶能够在所述识别片段之外对所述初级组成片段进行切割；对所述中级组成片段进行若干轮扩增，直至符合第二长度要求，得到目标双链DNA；其中，所述扩增步骤包括：采用特定引物对上一轮扩增完成的中级组成片段进行聚合酶链式反应扩增，得到特异双链DNA；其中，所述特定引物能够结合到所述中级组成片段的起始位点，并且所述特定引物中含有限制性内切酶的识别片段；所述特异双链DNA的至少一端含有所述识别片段；采用所述限制性内切酶识别所述特异双链DNA中的所述识别片段并在所述识别片段之外对所述特异双链DNA进行切割，得到粘性双链DNA；其中，所述粘性双链DNA的至少一端形成粘性单链末端；对所述粘性双链DNA进行退火处理，使所述粘性双链DNA通过所述粘性单链末端两两连接，得到当前轮扩增完成的中级组成片段。
全文数据：
权利要求：
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