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申请/专利权人：江南大学

摘要：本发明涉及蛋白领域，尤其涉及一种具有降血糖、降血压活性的山羊乳酪蛋白肽的制备。本发明的制备方法包括：先将山羊奶处理得到山羊乳酪蛋白。利用计算机虚拟酶切山羊奶酪蛋白，并预测不同蛋白酶切割山羊乳酪蛋白得到的多肽活性，筛选出最佳抑制DPP‑IV酶和ACE酶的蛋白酶种类，之后利用不同蛋白酶对山羊乳酪蛋白进行水解，并验证水解产物的活性，最后对水解产物进行纯化即为山羊乳酪蛋白肽。本发明方法利用生物信息学作为山羊乳酪蛋白活性预测的工具，可节省大量时间、科研成本、准确度高且具有靶向指导作用。利用本发明可制备获得具有DPP‑IV抑制活性和ACE抑制活性，蛋白回收率高、分子量较低且具有较好的胃肠消化稳定性的山羊乳酪蛋白肽。

主权项：1.一种具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）基于生物信息学预测不同蛋白酶处理山羊奶酪蛋白得到山羊奶酪蛋白肽的降血糖、降血压活性，并利用生物信息学计算机虚拟筛选出较高降血糖、降血压活性的多种酶；所述步骤（1）具体为：从蛋白质三维结构数据库RCSBPDB中下载山羊乳酪蛋白的各种蛋白类型的一级结构；利用BIOPEP数据库中的“ENZYMESACTION”功能对不同类型的山羊乳酪蛋白进行的虚拟蛋白酶切割，并根据蛋白酶切割后的具有DPP-IV酶、ACE酶的抑制活性的肽片段数量a和氨基酸链长度N的比率预测蛋白酶切割后的肽序列的降血糖、降血压活性，筛选出较高降血糖、降血压活性的多种酶；所述步骤（1）筛选出的较高降血糖、降血压活性的多种酶为菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、木瓜蛋白酶＋蛋白酶K组合酶；（2）将计算机模拟筛选出的多种酶中的任一种或者组合分别制备不同的山羊奶酪蛋白酶解物，具体操作为：将山羊奶酪蛋白加入蒸馏水，配制成质量浓度为2-10%的反应底物，之后加入所述步骤（1）筛选出的多种酶中的任一种或者组合，使蛋白酶与底物的最终比例ES为3000-15000Ug，酶解过程按照不同酶种类的最佳酶解条件进行反应，酶解过程中保持恒定的pH值，反应结束后灭酶，离心收集沉淀冻干，粉碎即为酶解产物山羊乳酪蛋白肽；将冷冻干燥后的山羊乳酪蛋白肽用蒸馏水溶解，然后用超滤膜进行分离纯化，取滤液冷冻干燥即为纯化后的山羊乳酪蛋白肽；（3）通过实际试验测试并比较不同酶解产物的降血糖、降血压活性，验证计算机虚拟筛选的准确性，并得到更高降血糖、降血压活性的酶的种类，由更高降血糖、降血压活性的酶酶解处理得到的酶解产物即为具有更高降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽；所述步骤（2）得到的更高降血糖、降血压活性的酶为木瓜蛋白酶+蛋白酶K组合酶，其中，木瓜蛋白酶：蛋白酶K的复合质量比为（1~2）:（1~2），得到的山羊乳酪蛋白肽DPP-IV抑制率不低于86%，山羊乳酪蛋白肽ACE抑制率不低于82%，蛋白回收率不低于85%。

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