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申请/专利权人：蓬莱诺康药业有限公司;远大生命科学(辽宁)有限公司

摘要：本发明提供一种矛头蝮蛇血凝酶的纯化方法，所述方法包括以下步骤：将矛头蝮蛇蛇毒预处理后，依次经过苯甲脒琼脂糖凝胶亲和层析、阳离子交换层析和疏水层析，得到矛头蝮蛇血凝酶。本发明提供的方法进一步简化了工艺步骤，极大地缩短了血凝酶的纯化周期，减少过程环境暴露风险，其工艺稳定性高，产品质量一致性好，利于临床用药安全。

主权项：1.一种矛头蝮蛇血凝酶的纯化方法，所述方法包括以下步骤：将矛头蝮蛇蛇毒预处理后，依次经过苯甲脒琼脂糖凝胶亲和层析、阳离子交换层析和疏水层析，得到矛头蝮蛇血凝酶，其中所述方法包括以下步骤：1在室温下，将预处理后的矛头蝮蛇蛇毒溶于包含20-100mMTris-HCl和0.1-1MNaCl且pH为6.0-10.0的亲和层析缓冲液中，得到浓度为50-200mgmL的溶液，然后离心取上清液；2对步骤1得到的上清液进行苯甲脒琼脂糖凝胶亲和层析，使用包含0.05-1M精氨酸、20-100mMTris-HCl和0.1-1MNaCl且pH为6.0-10.0的亲和层析洗脱液洗脱，收集目标组分；所述亲和层析的填料选自BenzamidineSepharose6B或BenzamidineSepharose4B；3对步骤2收集的目标组分进行阳离子交换层析，使用含有0.05-1MNaCl和5-100mMPB且pH为5.0-7.0的阳离子交换层析洗脱液以等度或线性梯度方式洗脱，收集目标组分；所述阳离子交换层析的填料选自SPCMSepharoseFastFlow、SPCMSepharoseHighPerformance、SourceS或MonoS；4对步骤3收集的目标组分经疏水层析，使用含有0-0.9M硫酸铵和0.02-0.5M的缓冲盐且pH为3.0-9.0的疏水层析洗脱液洗脱，收集目标组分，得到矛头蝮蛇血凝酶；所述疏水层析的填料选自PhenylButyl-SSepharose6FastFlow、PhenylButylSepharoseHighPerformance或ButylSepharoseHighPerforman。

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