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申请/专利权人：广州滋得洛夫生物科技有限责任公司
摘要：本发明涉及一种从桦褐孔菌中提取超氧化物歧化酶的制备方法和应用，属于生物技术领域，本发明制备方法采用桦褐孔菌作为原料，经处理液浸泡处理，处理液的成分包含乙醇、黄嘌呤、次黄嘌呤、咖啡因和神经酸，浸泡处理后能够提高超氧化物歧化酶产率和活性，在破壁提取后，经两步纯化，提高超氧化物歧化酶的纯度，能够大幅提高超氧化物歧化酶液对基物作用的总活性；另外，本发明方法在提高超氧化物歧化酶品质的同时，不会大幅增加成本。
主权项：1.一种从桦褐孔菌中提取超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：取桦褐孔菌，按质量比，桦褐孔菌:处理液=1:（5～8），将桦褐孔菌浸泡在处理液中，30℃～38℃浸泡30h～40h，取出桦褐孔菌，水洗去除处理液，得到处理后的桦褐孔菌；所述处理液的成分质量比为，水:乙醇:黄嘌呤:次黄嘌呤:咖啡因:神经酸=100:（10～20）:（0.1～0.3）:（0.1～0.3）:（3～5）:（0.5～2）；S2：按质量比，处理后的桦褐孔菌:水=1:（0.5～1），进行配比，细胞破壁打浆，得到浆液A；向浆液A中加入KH2PO4-K2HPO4缓冲溶液，在40℃～50℃，100rmin～200rmin搅拌混合浸泡6h～8h，3000rmin～4000rmin离心，收集上清液，得到酶粗提液，喷雾干燥，得到酶粗提物；S3：按质量比，酶粗提物:KH2PO4-K2HPO4缓冲溶液=1:（4～5），将酶粗提物分散于KH2PO4-K2HPO4缓冲溶液中，采用盐酸溶液调节pH5.3～5.5，3500rmin～4000rmin离心，收集上清液，得到酶精提液；S4：将酶精提液采用超滤管离心过滤，滤芯为10kDa和60kDa超滤膜，截取10kDa至60kDa之间的滤液，浓缩，冻干，得到超氧化物歧化酶。
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