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申请/专利权人：郑州大学

摘要：本发明涉及基于肺炎链球菌的生物杂合自由基发生器的制备方法及应用，可不受肿瘤乏氧限制持续产生高活性的•OH高效杀伤肿瘤，其解决的技术方案是，包括以下步骤：1）制备叠氮修饰的肺炎链球菌S.pn‑N3；2）制备炔基修饰的Fe3O4纳米颗粒Fe3O4‑DBCO；3）制备基于肺炎链球菌的生物杂合自由基发生器Fe3O4@S.pn；本发明方法操作方便，稳定可靠，所制得的肿瘤生物杂合自由基发生器具有选择性高、持续高效等优势，在肿瘤治疗方面可突破肿瘤乏氧微环境限制选择性持续产生高活性•OH，提高肿瘤治疗效果，是肿瘤治疗药物上的创新。

主权项：1.一种基于肺炎链球菌的生物杂合自由基发生器的制备方法，其特征在于，首先分别在S.pn和Fe3O4表面修饰叠氮基团N3和DBCO，通过N3与DBCO的炔基发生点击化学反应，即得生物杂合自由基发生器，具体包括以下步骤：1）制备叠氮修饰的肺炎链球菌S.pn-N3培养S.pn8-10h，用新鲜配置的THB培养基+5%胎牛血清扩大培养10倍，培养3-5h，培养结束后，6000g离心5-10min收集细胞，并重悬于含有4-6mMH-D-DAPN3·HCL的新鲜THB培养基或新鲜THB培养基+5%胎牛血清中继续培养60-80min，然后6000g离心5-10min收集细胞，并用PBS缓冲液洗涤细胞2次，得叠氮修饰的肺炎链球菌S.pn-N3；2）制备炔基修饰的Fe3O4纳米颗粒Fe3O4-DBCO将10-40mgDSPE-PEG2000-DBCO溶解于2-8mL氯仿中，超声5-10min，然后转移到干燥的玻璃圆底烧瓶中；随后，将5-20mg油酸包覆的Fe3O4纳米粒溶于1-4mL氯仿，将Fe3O4溶液加入DSPE-PEG2000-DBCO溶液中，超声混合5-10min后将上述玻璃圆底烧瓶55℃旋蒸至溶剂完全蒸干，加入5-20mL超纯水超声20-30min，获得Fe3O4-DBCO纳米粒；3）制备基于肺炎链球菌的生物杂合自由基发生器Fe3O4@S.pn将步骤1）制备的S.pn-N3细胞重悬于步骤2）制备的3-12mL浓度为50-200μgmL的Fe3O4-DBCO制剂体系中孵育3-5h，随后，取200μL生物正交后的菌液，4000rpm，4℃，离心3-5min，弃去上清，PBS洗涤2次后重悬于3-12mLPBS中，得基于肺炎链球菌的生物杂合自由基发生器。

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百度查询： 郑州大学 一种基于肺炎链球菌的生物杂合自由基发生器的制备方法及应用