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申请/专利权人：内蒙古自治区农牧业科学院

摘要：本发明公开了一种粮油生物毒素快速检测芯片、检测方法及其制备方法，检测芯片包括芯片底盘及芯片上盖，芯片上盖的中心设置有加样孔，在芯片上盖上设置有五个以上的显色孔；芯片底盘中心的加样垫安装位设置有加样垫，芯片底盘上对应于显色孔均匀设置有五个以上的试纸条安装位；分别用于检测黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和呕吐毒素的检测试纸条及阴性质控试纸条设置于试纸条安装位，检测试纸条及阴性质控试纸条的一端与加样垫的边缘触接。本发明一张检测芯片可一次性完成黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A及呕吐毒素中的1‑4种生物毒素检测，前处理简单，可直接肉眼观察检测结果，对操作人员专业性要求低，结果准确。

主权项：1.一种粮油生物毒素快速检测芯片，包括芯片底盘及盖设于芯片底盘上的芯片上盖，其特征在于：所述芯片上盖的中心设置有加样孔，在所述芯片上盖上，在以加样孔为中心的圆上均匀设置有五个以上的显色孔；芯片底盘的中心对应于所述加样孔设置有加样垫安装位，所述芯片底盘上对应于所述显色孔均匀设置有五个以上的从加样垫安装位处向所述芯片底盘的边缘延伸的试纸条安装位；还包括分别用于检测黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和呕吐毒素的检测试纸条及阴性质控试纸条，所述加样垫安装位设置有加样垫，所述检测试纸条及所述阴性质控试纸条设置于所述试纸条安装位，所述检测试纸条及所述阴性质控试纸条的一端与所述加样垫的边缘触接；所述芯片底盘与所述芯片上盖连接至一起，将所述加样垫、所述检测试纸条及所述阴性质控试纸条压紧至所述芯片底盘与所述芯片上盖之间；所述检测试纸条包括PVC底板及从左到右胶接于所述PVC底板上表面的样品垫、金标结合垫、NC膜及吸水纸，所述样品垫的右端部叠置于所述金标结合垫的左端部的上方，所述金标结合垫的右端部叠置于所述NC膜的左端部的上方，所述吸水纸的左端部叠置于所述NC膜的右端部的上方，所述样品垫与所述加样垫触接；所述样品垫为玻璃纤维材质，样品垫上均匀喷涂样品垫处理液后，置于37℃干燥箱干燥4h，所述样品垫处理液是以pH为7.4磷酸盐缓冲液质量为基准配制，所述样品垫处理液包括磷酸缓冲液、1.5％BSA、0.3％吐温20、5％蔗糖及2.5％海藻糖；金标结合垫为聚酯纤维材质，金标结合垫上喷涂金标结合垫处理液预处理后，置于37℃干燥箱干燥3h，所述金标结合垫处理液是以pH为7.4磷酸盐缓冲液质量为基准配制，所述金标结合垫处理液包括磷酸盐缓冲液及1％PEG20000聚乙二醇；配制重悬液，以pH为7.4磷酸盐缓冲液质量为基准配制，所述重悬液包括磷酸盐缓冲液、0.8％PEG20000聚乙二醇、2％吐温20及10％NaCl；采用柠檬酸三钠法制备质量分数为0.01％、粒径为30nm的胶体金溶液，分别用黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A及呕吐毒素的单克隆抗体标记胶体金溶液；将标记好抗体的胶体金溶液放置4℃冷藏反应12h后，以8000rmin、4℃离心20min，弃去上层清液，吸取重悬液，将金标抗体重悬，利用喷金仪喷涂于预处理好的金标结合垫上，随后将其置于37℃环境干燥4h；黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A及呕吐毒素对应包被抗原的浓度分别为0.2mgmL、0.2mgmL、0.5mgmL及0.2mgmL，将包被抗原均匀喷涂于不同NC膜上的T线处，浓度0.3mgmL羊抗鼠IgG二抗均匀喷涂于NC膜的C线处。

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