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申请/专利权人：吉林大学

摘要：本发明涉及用于精准测定噻吩并吡啶类药物与靶点结合比率的方法。首先采集受试对象用药后的血液样品并分离血小板，同时通过肝微粒体体外孵育制备稳定同位素标记的探针分子。将探针分子加至血小板样品中，对血小板上空靶点进行饱和程度的特异性占位。继而分离血小板膜上靶点蛋白，加入解离试剂和衍生化试剂，将靶点上共价结合的药物活性代谢物和探针分子解离下来并转化为稳定的衍生物。以药物活性代谢物的衍生物作为与药物结合靶点的替代分析物；以探针分子衍生物作为未与药物结合靶点的替代分析物。采用液相色谱串联质谱方法对二种小分子替代分析物进行分析，通过二者色谱峰面积的相对比值可确定P2Y12靶点药物结合比率，并借助标准品实现绝对定量。

主权项：1.一种测定体内噻吩并吡啶类药物活性代谢物与血小板膜上P2Y12受体结合比率的方法，其特征在于所述方法包含以下步骤：a采集接受噻吩并吡啶类药物或其药学上可接受的盐、晶型或制剂形式的受试对象的血液样品，并从血液样品中分离富血小板血浆，其中，所述噻吩并吡啶类药物Thie结构如式I所示，其活性代谢物Thie-AM结构如式IV所示， 其中-R1为-OCH3，-OCD3或环丙基即，-CHCH22，X为Cl或F，-R2为-H或-OR4，其中，-OR4为在体内可被水解或酶解的基团，其中，所述结合指噻吩并吡啶类药物活性代谢物Thie-AM通过二硫键与血小板膜上P2Y12受体共价结合；b在肝微粒体与式II所示的探针前体IL组成的孵育体系中通过体外孵育的方式现场制备探针IL-AM，探针结构如式III所示， 其中，-R3为-OCD3，-OCH3或氘代环丙基即，-CDCD22，且当式I中R1为-OCH3，X为Cl时，式II和式III中-R3为-OCD3，X为Cl，当式I中R1为-OCD3，X为Cl时，式II和式III中-R3为-OCH3，X为Cl，当式I中R1为-CHCH22，X为F时，式II和式III中-R3为-CDCD22，X为F；c将步骤b所得含有探针IL-AM的孵育体系加入至步骤a所得富血小板血浆样品中，对血小板膜上仍空余的P2Y12受体进行占位，其中，所述占位指探针IL-AM通过形成二硫键共价结合在血小板膜上仍空余的P2Y12受体上，占据二磷酸腺苷ADP或药物活性代谢物Thie-AM与P2Y12的结合位点，其中，所述空余的P2Y12受体指未与药物活性代谢物Thie-AM发生共价结合的P2Y12受体，其中，所述探针IL-AM与P2Y12的结合与步骤a所述药物活性代谢物Thie-AM与P2Y12的结合一致；d从步骤c获得的占位后的富血小板血浆样品中分离血小板膜碎片，并从膜碎片中获得P2Y12-Thie-AM和P2Y12-IL-AM共价复合物混合物；e通过加入解离试剂将从步骤d获得的P2Y12-Thie-AM和P2Y12-IL-AM共价复合物混合物上共价挂载的药物活性代谢物Thie-AM及探针IL-AM解离下来；f将步骤e获得的所述游离药物活性代谢物Thie-AM及所述游离探针IL-AM转化为更稳定的质谱衍生物Thie-AM-Der和IL-AM-Der，并通过液相色谱-质谱法测定；g通过Thie-AM-Der的色谱峰面积与IL-AM-Der和Thie-AM-Der色谱峰面积之和进行比较来确定采样时间点受试对象血小板膜上P2Y12靶点与药物活性代谢物Thie-AM的结合比率。

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百度查询： 吉林大学 一种噻吩并吡啶类药物靶点结合比率的测定方法