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一种DNA+RNA共检测方法 

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申请/专利权人:阔然生物医药科技(上海)有限公司

摘要:本发明公开了一种DNA+RNA共检测方法,包括如下步骤:S1,DNARNA共提取;S2,待测样本中加入第一混合液,孵育;第一混合液含有Tag随机逆转录引物,其5’端具有如SEQIDNO.1所示的特异性序列;S3,加入第二混合液,在PCR仪中反应;S4,加入第三混合液,孵育;S5,纯化回收;S6,建立预文库;S7,对预文库进行靶向富集;S8,对富集后的文库进行NGS测序;S9,生物信息分析。传统分开检测的方法需要两份建库和富集试剂,DNA和RNA各一套。本发明共检测方法仅消耗一套建库和富集试剂,加上RNA反转录和二链合成,即可实现DNA和RNA的检测,节省约30%的试剂成本,整个检测流程更简单。本发明重新设计反转录引物,可以有效的区分开DNA来源和RNA来源的数据,使两者的检测效果互不影响。

主权项:1.一种DNA+RNA共检测方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一,将提取的样本放入样本保存液,然后进行DNARNA共提取,获得样本的DNA和RNA;步骤二,于步骤一得到的待测样本中加入第一混合液,混合,孵育;其中,所述第一混合液包括一链合成反应缓冲液和Tag随机逆转录引物;所述Tag随机逆转录引物的5’端具有如SEQIDNO.1所示的特异性序列;步骤三,于步骤二的产物中加入第二混合液,混匀后在PCR仪中反应;步骤四,于步骤三的产物中加入第三混合液,混匀后孵育;步骤五,步骤四的一部分产物使用磁珠进行核酸纯化回收,得到第一回收产物;步骤四的另一部分产物使用超声打断仪器进行机械打断,再使用磁珠进行核酸纯化回收,得到第二回收产物;步骤六,将步骤五得到的第一回收产物和第二回收产物混合,根据DNA建库试剂盒说明书进行末端修复、连接接头和扩增,得到预文库;步骤七,根据液相杂交捕获试剂盒说明书对所述预文库进行靶向富集;步骤八,对富集后的文库进行NGS测序;步骤九,生物信息分析:利用逆转录引物的如SEQIDNO.1所示的特异性序列,拆分NGS数据中的DNA数据和RNA数据,然后分别进行后续分析和相应突变鉴定。

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权利要求:

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