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申请/专利权人：安徽农业大学

摘要：本发明涉及细胞生物学领域，特别涉及一种猪血小板裂解液及其制备方法。该制备方法包括：将从猪全血中采集到的血小板重悬于已离心去除纤维蛋白原的猪血浆中，经反复冻融，离心后收集上清，上清液经过滤器进行过滤除菌，滤过液即为猪血小板裂解液。本发明以猪血液为来源制备血小板裂解液，减少异源血清造成的异种蛋白残留风险，减少可能存在的未知牛内源性传染病对培养猪细胞产生影响的隐患。

主权项：1.一种猪血小板裂解液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a、将CPDA-1抗凝剂添加至采血瓶中，选取健康待宰生猪进行采血，并收集至采血瓶，转移至15ml离心管A中；b、将离心管A在20-22℃下以200g离心20min，观察到离心管A内的液体自下而上依次分为底层、中层和上层；c、使用移液管将离心管A中上层23转移到离心管L中，将数个离心管L富集到离心管M中，将离心管M在20-22℃下以3200r离心20min，血小板颗粒沉积在底部，将上层血浆转移至离心管O中，将离心管O内的血浆经0.22μm滤器过滤除菌后，存与-20℃冰箱冷冻保存，离心管M中剩余的液体转移至离心管K中；d、向离心管A中剩余的液体内按1:1的比例添加HEP缓冲液，将A离心管倒置混匀，之后在20-22℃下以100-200g离心15-20min，然后取上清液至新的离心管F中，将数个离心管F中的液体聚在管H中，离心管H在20-22℃下以3200r离心20min，血小板颗粒沉积在底部，上层转移至离心管J中，新的离心管中剩余的为血小板并转移至离心管K中，并存于-20℃冰箱冷冻保存；e、以497:3的比例向离心管O中加入添加浓度为1.55molL的CaCl2溶液，并在室温下凝固40min以上，获得凝固的血浆；f、将所得凝固的血浆高速离心后，获得去除了纤维蛋白原的血浆；g、将离心管K中的液体重悬于步骤f中所得去除了纤维蛋白原的血浆中，在-80℃和4℃条件下反复冻融三次，6000g离心30min后收集上清，上清液经0.22μm孔径过滤器进行过滤除菌，滤过液即为猪血小板裂解液；1升HEP缓冲液的制备方法包括：将8.18gNaCl、0.201gKCl、0.905gHEPES和1.90gEGTA加入到800mL双蒸水中，加热溶解，用2NNaOH调节溶液pH至7.4，双蒸水定容至1000mL，0.22μm的微孔滤器过滤，4℃保存备用。

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