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申请/专利权人：青岛理工大学

摘要：本发明涉及一种基于环境DNA技术监测再生水受纳河流生物多样性的方法，包括步骤如下：步骤1：设置采样点，采集监测区域水样；步骤2：水样过滤与eDNA提取；步骤3：置多对通用引物；步骤4：PCR扩增；步骤5：高通量测序；步骤6：数据优化；步骤7：OTU聚类，生物信息学注释；步骤8：根据生物信息学注释结果，选择通用引物，进行多样性分析。本发明无需捕捞任何生物，不会对生态系统造成破坏、不伤害水生生物。仅需采取河流水样即可监测水环境中多类物种组成，检测便捷、耗费低，精度高，结果可靠，具有成本更低、时间更短、效率更高、监测范围更广的优势。

主权项：1.一种基于环境DNA技术监测再生水受纳河流生物多样性的方法，包括步骤如下：步骤1：设置采样点，采集监测区域水样；步骤2：水样过滤与eDNA提取；采集后12个小时内，对每个点位采集的水样等比混合后使用无菌滤膜过滤，然后对过滤过水样的滤膜进行DNA提取；步骤3：设置多对通用引物；确定本地优势物种，根据本地优势物种存在情况设置通用引物，优势物种种类包括浮游植物、鱼类、浮游动物与底栖动物；所述通用引物包括：浮游植物3对，分别为16SV3F_16SV3R、CITSF_CITSR、A1380F_A1510R；鱼类4对，分别为COIF2F_COIR2R、16S1634MF_16S1634MR、L14912CYBF_H15149CYBR、B12S-F_B12S-R；浮游动物与底栖动物共用引物3对，分别为16SF1F_16SR1R、COI1F_COI2R、TAReuk454FWD1F_TAReukREV3R；16SV3F的序列为ACCTACGGGRSGCWGCAG；16SV3R的序列为ATTACCGCGGCTGCTGG；CITSF的序列为GCATCGATGAAGAACGCAG；CITSR的序列为CTTTTCCTCCGCTTATTGATATG；A1380F的序列为CCCTGCCHTTTGTACACAC；A1510R的序列为CCTTCYGCAGGTTCACCTAC；COIF2F的序列为TTCTCCACCAACCACAAGAYATYGG；COIR2R的序列为CACCTCAGGGTGTCCGAAAAYCAAA；16S1634MF的序列为GCCTGTTTACCAAAAACATCAC；16S1634MR的序列为CTCCATAGGGTCTTCTCGTCTT；L14912CYBF的序列为TTCCTAGCCATACAYTAYAC；H15149CYBR的序列为GGTGGCKCCTCAGAAGGACATTTGKCCYCA；B12S-F的序列为ACTGGGATTAGATACCCC；B12S-R的序列为TAGAACAGGCTCCTCTAG；16SF1F的序列为GACTGTGCTAAGGTAGCRTRAT；16SR1R的序列为TAATCCAACATCGAGGTMGYA；COI1F的序列为GGWACWGGWTGAACWGTWTAYCCYCC；COI2R的序列为GGRGGRTASACSGTTCASCCSGTSCC；TAReuk454FWD1F的序列为CCAGCASCYGCGGTAATTCC；TAReukREV3R的序列为ACTTTCGTTCTTGATYRA；步骤4：PCR扩增；首先随机选取样品进行预实验，以确保在最低的循环数中绝大多数的样品能够扩增出浓度合适的产物，为所有样品的正式试验做充分准备；步骤5：高通量测序；使用NEXTFLEXRapidDNA-SeqKit进行构建文库；步骤6：数据优化；数据优化使用fastp软件对原始测序序列进行质控，使用FLASH软件进行拼接；步骤7：OTU聚类，生物信息学注释；使用UPARSE软件，根据97%的相似度对序列进行OTU聚类；步骤8：根据生物信息学注释结果，选择通用引物，进行多样性分析；根据分析结果，选择可以扩增出本地优势物种、目的物种种类数量多的引物，作为通用引物进行后续实验，进行多样性分析；对通用引物物种分类统计结果进行Rank-Abundance曲线分析、Alpha多样性分析。

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权利要求：

百度查询： 青岛理工大学 一种基于环境DNA技术监测再生水受纳河流生物多样性的方法