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申请/专利权人：昆明理工大学

摘要：本发明涉及干细胞和类胚胎技术领域，尤其涉及一种信号巢细胞以及类胚胎的制备方法。本发明通过采用特定的诱导培养基诱导始发态人多能干细胞制得信号巢细胞，并基于该信号巢细胞建立类胚胎的制备方法。本发明的类胚胎在体外成功长出了双胚盘、羊膜腔和卵黄囊的三维结构，以及上胚层、胚外内胚层、胚外中胚层、羊膜、原条和原始生殖细胞等多谱系的协同发育，能够模拟人着床后早期胚胎的谱系发育，为体外研究人着床后早期胚胎的发育机制提供新模型、同时也针对胚胎异常发育进行药物筛选和毒理测试提供新平台。

主权项：1.一种类胚胎的体外制备方法，其特征在于，包括：将信号巢细胞与原始态人多能干细胞混合，混合后采用Matrigel滴进行三维延长培养，制得所述类胚胎，所述类胚胎制备过程中采用M1培养基，所述M1培养基中包括：基础培养基、以及0.25-1％N2、0.5-2％B27、0.1-1％GlutaMAX、0.1-1％非必需氨基酸、0.01-0.1mMβ-巯基乙醇、1-100μgml左旋抗坏血酸-2-磷酸镁盐、0.05-0.2％化学脂质浓缩液、1-20μgml胰岛素、0.01-0.05μgml黄体酮、5-50ngml表皮细胞生长因子、0.5-2μMCHIR99021、0.25-1μMA83-01、0.5-2μMSB431542、0.4-1mM丙戊酸；所述基础培养基为DMEMF12与Neurobasal的混合培养基；所述信号巢细胞的制备方法包括：采用诱导培养基诱导始发态人多能干细胞24h后，用滋养层干细胞培养基培养细胞至第2天得到所述信号巢细胞；所述诱导培养基包括：基础培养基DMEMF12、以及10-20％血清替代品、0.1-1％非必需氨基酸、0.01-0.1mMβ-巯基乙醇、2-20μgml胰岛素、2-10ngml人骨形态发生蛋白4、2-10μMSB431542、2-10μMY27632；所述滋养层干细胞培养基的配方如下：基础培养基DMEMF12添加0.1mMβ-巯基乙醇、0.2％胎牛血清、0.3％牛血清白蛋白、1％胰岛素-转铁蛋白-硒-乙醇胺添加剂、50μgml左旋抗坏血酸-2-磷酸镁盐、50ngml表皮细胞生长因子、2μMCHIR99021、0.5μMA83-01、1μMSB431542、0.8mM组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA、5μMY27632。

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