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申请/专利权人：美尔健(深圳)生物科技有限公司;平阴玫好生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种玫瑰多肽的制备方法与应用，属于多肽应用技术领域，包括以下步骤：S1.破壁处理：将选取的玫瑰花充分研磨，加入PBS缓冲液后破壁处理，然后置于温度为35‑45℃的恒温箱中，进行25‑45min超声处理得到含有玫瑰花提取物的混合液；S2.酶解：将含有玫瑰花提取物的混合液中加入复合酶，搅拌均匀后加热至40‑90℃，调节pH5‑7，超声波处理20‑60min，得到初级酶解液；S3.低温抑制酶活与初步纯化：将S2得到的初级酶解液迅速置于冰浴条件下的反应瓶中，控制初级酶解液的温度为0‑8℃，冰浴时间为10‑25min，之后进行离心，选用截留分子量为10KDa超滤膜对初级酶解液进行初步超滤。解决了现有技术中化学类护肤品对皮肤刺激较大的问题。具有保湿效果好、低毒副作用的优势。

主权项：1.一种玫瑰多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.破壁处理：将选取的玫瑰花充分研磨，加入PBS缓冲液后破壁处理，然后置于温度为35-45℃的恒温箱中，进行25-45min超声处理得到含有玫瑰花提取物的混合液；S2.酶解：将含有玫瑰花提取物的混合液中加入复合酶，搅拌均匀后加热至40-90℃，调节pH5-7，超声波处理20-60min，得到初级酶解液；S3.低温抑制酶活与初步纯化：将S2得到的初级酶解液迅速置于冰浴条件下的反应瓶中，控制初级酶解液的温度为0-8℃，冰浴时间为10-25min，之后进行离心，选用截留分子量为10KDa超滤膜对初级酶解液进行初步超滤分离，即得玫瑰多肽酶解液；S4.碱醇提取：制备碱醇溶液，然后将碱醇溶液与玫瑰多肽酶解液以1：（10-20）的体积比混合，超声提取30-60min，回流提取1-3次，每次120-180min，过滤，得提取液；S5.浓缩、酸化：将提取液在60-90℃下进行低压浓缩，蒸发掉其体积含量的23-34，冷却至0-15℃，静置6-8h，得到浓缩液后用盐酸调至pH值为2-3，搅拌，使其充分溶解后，将滤液通过超滤膜，得超滤液；S6.纯化：将得到的超滤液通过离子交换纯化和疏水性层析后经C-18反相色谱分离，最终得到高纯度玫瑰多肽；所述S2中复合酶为胃蛋白酶、中性蛋白酶、纤维素酶和果胶酶的混合物，其中摩尔比为（10-15）：（5-7）：（2-3）：（1-3）；所述S4中碱醇溶液中溶质为乙醇钠、乙醇钾中的一种或两种组合；所述S4中碱醇溶液中溶剂为乙醇、异丙醇中的一种或两种组合；碱醇溶液的质量浓度为20-30%，所配置的碱醇溶液的pH为10-12；所述S6具体步骤为：S61.阳离子交换树脂预处理：将阳离子交换树脂用氯化钠浸泡12-24h，洗至无色；再加入5-8倍量的5%氢氧化钠浸泡4-8h，并用纯化水洗至中性，最后加入5-8倍量的5%盐酸浸泡5-10h，使树脂转为H型，并用纯化水洗至pH为4-6，即可制备得阳离子交换树脂柱；S62.采用阳离子交换树脂进行离子交换吸附，静态吸附1-3h，收集洗脱物进行冷冻干燥后配制成20-80mgmL多肽溶液，采用SephadexG-200进行柱层析，收集样品并冷冻干燥，得到去除蛋白酶的冷冻干燥多肽；S63.将得到的冷冻干燥多肽配制成10-50mgmL多肽溶液，用C-18反相色谱柱分离，得到纯化后的玫瑰多肽；所述S61中，所述的阳离子交换树脂为强酸型阳离子交换树脂；所述S62中，采用SephadexG-200进行柱层析的步骤为：将处理好的SephadexG-200装入层析柱，径高比1：20-1：40，使用蒸馏水按照5%CVmin流速进行平衡，在下游使用紫外检测器在220nm进行检测；将配好的多肽溶液上样，体积为柱体积的5-15%，待样品完全进入凝胶柱床，使用蒸馏水按照5%CVmin冲洗，220nm检测并收集第二个洗脱峰；所述S63中，C-18反相色谱柱分离的具体如下：流动相为A：水+0.1%TFA，B：乙腈+0.1%TFA；流动相A、B均使用0.22μm滤膜过滤，按照体积比流动相A：流动相B=70：20，流速1mLmin，进样量：20μL，检测波长220nm进行检测并收集；梯度洗脱程序：0.01-25.00min，A：85-60%，B：15-40%，25.00-33.00min，A：60-0%，B：40-100%，33.00-38.00min，A：0-0%，B：100-100%，38.00-40.00min，A：0-85%，B：100-15%，40.00-42.00min，A：85-85%，B：15-15%。

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