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申请/专利权人：湖北工业大学

摘要：本发明提供一种荧光共振能量转移的竞争型免疫传感器的制备方法及其应用，以氧化石墨烯和L‑半胱氨酸为原料，通过高温水热反应合成了氮、硫共掺杂的石墨烯量子点N,S‑GQDs，采用Stober法通过控制正硅酸乙酯的量来控制SiO2层的厚度以及表面氨基化，合成了Ag@SiO2NPs，并基于金属增强荧光的原理，将Ag@SiO2NPs负载在N,S‑GQDs上，增强了N,S‑GQDs的荧光强度，Ag@SiO2@N,S‑GQDs纳米复合材料为标记物，由于Ag@SiO2NPs对N,S‑GQDs荧光效果的增强，可以提高传感器的灵敏度，降低传感器的检测限。本发明以Ag@SiO2@N,S‑GQDs纳米复合材料标记的抗原为供体，抗体修饰的AuNPs为受体，利用荧光共振能量转移和竞争免疫分析法构建的生物传感器避免了使用操作复杂和昂贵的仪器，缩短了检测时间，具有检测限低、灵敏度高、操作简单，特异性高等特点。

主权项：1.一种荧光共振能量转移的竞争型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：Ag@SiO2@N,S-GQDs纳米复合材料的制备：取APTES加至Ag@SiO2NPs中，并在15-35℃下搅拌10-15小时，得到氨基化Ag@SiO2NPs溶液，取N,S-GQDs悬浮液和氨基化Ag@SiO2NPs溶液于反应器中，15-35℃下连续搅拌10-15h，将未连接的N,S-GQDs量子点分离，离心，冷冻干燥得到所述Ag@SiO2@N,S-GQDs纳米复合材料；步骤2：Ag@SiO2@N,S-GQDs-抗原荧光探针溶液的制备：将步骤1制备的Ag@SiO2@N,S-GQDs纳米复合材料溶于水中超声分散配制成浓度为1mgmL的Ag@SiO2@N,S-GQDs溶液，Ag@SiO2@N,S-GQDs1mgmL溶液，加入EDC在15-35℃下搅拌，以激活Ag@SiO2@N,S-GQD上的游离羧酸基团，添加NHS，在30-50℃下搅拌10-15h，添加抗原，并在30-40℃下在黑暗中反应1-3小时得到Ag@SiO2@N,S-GQDs-抗原荧光探针溶液；步骤3：抗体-AuNPs探针的制备：用0.1molLK2CO3或0.1mmolLHCl将AuNPs溶液的pH值调至7，然后将抗体添加到步骤4制备的AuNPs中，30-40℃下搅拌1-5h,得到抗体-AuNPs探针溶液；步骤4：荧光共振能量转移的竞争型免疫传感器的制备：将目标溶液加入到步骤3制备的抗体-AuNPs探针溶液中，混合均匀，并在30-40℃下反应20-60min，添加步骤2制备的Ag@SiO2@N,S-GQDs-抗原荧光探针溶液，并在一定温度下反应一段时间，得到所述荧光共振能量转移的竞争型免疫传感器；用荧光分光光度计测量在无抗原情况下，空白品的荧光强度记为F0；在有抗原的情况下，结合产物的荧光强度记为F，荧光强度的变化ΔF通过结合产物的荧光强度F减去空白品的荧光强度F0得到，利用一定浓度梯度的抗原的浓度与荧光强度的变化ΔF制作的标准曲线，即可通过荧光强度的变化ΔF得到抗原的浓度；所述步骤1中，Ag@SiO2NPs是通过如下方法制备得到的：将0.5-2％ww的柠檬酸三钠水溶液加至0.1-0.3mgmL的AgNO3水溶液中在80-110℃下反应0.5-3h，冷却，得到银纳米溶胶，将反应所得的银纳米溶胶用水清洗两遍，离心后的产物分散至超纯水中，取AgNPs，加入乙醇和水超声分散后，加入NH3·H2O溶液25ww％，搅拌，加入正硅酸乙酯，在15-35℃下连续搅拌一段时间，离心、乙醇洗涤，得到Ag@SiO2NPs；所述氨基化的Ag@SiO2NPs和N,S-GQDs悬浮液的体积比为1:1～10。

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