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申请/专利权人：山东省农业科学院
摘要：本发明公开了一种斑翅果蝇常染色体基因移码突变纯合品系的构建方法，属于基因编辑技术领域，包括以下步骤：1体外合成靶基因的sgRNA；2收集卵，注射sgRNA和Cas9蛋白的混合物，孵育，称为G0代；3饲养G0代至羽化，羽化后的成虫杂交，产生G1代，确定阳性个体；4将阳性个体的后代饲养至蛹，羽化；将羽化的成虫分别与野生型个体配单对交配，产生G2代；5将G2代饲养至化蛹，羽化；将杂合子自交，产生G3代；6将G3代饲养至化蛹，羽化；将纯合子自交，产生G4代；7饲养G4代并扩繁。本发明确立了一套用于纯化CRISPRCas9介导的常染色体基因移码突变品系的方法，为研究斑翅果蝇常染色体基因功能提供了技术支持。
主权项：1.一种斑翅果蝇常染色体基因移码突变纯合品系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1体外合成靶基因的sgRNA；所述靶基因为斑翅果蝇FoxO，靶标位点的核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示；所述体外合成靶基因的sgRNA的具体操作如下：设计并合成sgRNA的引物，引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示：合成sgRNA的DNA模板；纯化DNA模板；体外转录DNA模板；纯化sgRNA；2收集斑翅果蝇的卵，显微注射sgRNA和Cas9蛋白的混合物；注射后的卵放置在人工饲料管中孵育，称为G0代；3饲养G0代至羽化，羽化后的成虫杂交，产生G1代；检测G0代成虫的基因型，确定阳性个体；4将步骤3中的阳性个体的后代饲养至蛹，羽化；将羽化的成虫分别与野生型个体配单对交配，产生G2代，检测G1代成虫的突变类型，保留缺失插入的碱基数不为3的倍数的突变类型的后代；5将步骤4中的保留的突变个体的后代饲养至化蛹，羽化；羽化后的成虫区分雌雄并剪其翅膀鉴定杂合子；将杂合子自交，产生G3代；6将杂合子自交产生的G3代饲养至化蛹，羽化，羽化后的成虫区分雌雄并剪其翅膀鉴定纯合子；将纯合子自交，产生G4代；检测纯合子成虫的基因型，以明确确实为纯合子；7饲养G4代并扩繁。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山东省农业科学院 斑翅果蝇常染色体基因移码突变纯合品系的构建方法
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