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申请/专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
摘要：本发明公开了一种高效分离非洲猪瘟病毒的PAMsWSh细胞及其分离方法与应用，本发明在常规分离PAMs细胞并重悬后，依次用不同孔径细胞筛过滤除杂、用不含RNA酶的无核酸酶水在20s内重悬，然后加入含90%胎牛血清+10%的DMSO的细胞冻存液冻存；复苏细胞时先用含两性双抗和庆大双抗RPMI‑1640培养基混悬细胞，过滤离心后用含两性双抗和庆大双抗、12%胎牛血清的1640培养基重悬后培养6‑8h，接毒，收毒时间为4‑5d。通过排除红细胞干扰、去除可能存在的细胞团或碎片、筛选目标细胞大小的单细胞悬液，提高了细胞活力，提升了病毒分离率和拷贝数，同时也克服了细胞冻存周期短的问题，获得的PAMsWSh细胞为非洲猪瘟病毒的高效分离及病毒感染致病机制研究提供了有利工具。
主权项：1.一种高效分离非洲猪瘟病毒的PAMsWSh细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、常规分离猪肺泡巨噬细胞PAMs；步骤二、猪肺泡巨噬细胞的优化：将步骤一分离得到的猪肺泡巨噬细胞PAMs用每毫升含100IU两性霉素双抗和100IU庆大霉素双抗的RPMI-1640培养基重悬，依次采用筛网孔径为40μm、70μm及100μm细胞筛过滤除杂；除杂后以1200rmin的转速离心8min；获得的细胞沉淀用不含RNA酶的无核酸酶水在20s内重悬，去除红细胞，得到白净、透亮的细胞；然后用含血清的RPMI-1640培养基重悬细胞，并以1200rmin的转速离心5min，沉淀中立即加入含90%胎牛血清和10%二甲基亚砜的细胞冻存液，计数、冻存，即为精选的猪肺泡巨噬PAMsWSh细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心) 一种高效分离非洲猪瘟病毒的PAMs/WSh细胞及其分离方法与应用
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