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申请/专利权人：南京锐志生物医药有限公司
摘要：本发明涉及一种保护氨基酸对映异构体的测定方法。与现有技术相比，本发明通用性较强，色谱方法比较稳定，灵敏度较高，耐用性较好，且对起始物料中两种保护氨基酸的对映异构体检测皆适用；使用的溶剂正己烷，无水乙醇和三氟乙酸均为常用试剂，容易获得。不同试验室进行该色谱条件分析方法转移，均满足要求。
主权项：1.一种保护氨基酸对映异构体的测定方法，其特征在于，所述保护氨基酸选自Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Pro-OH中的一种，其对映异构体的含量不高于0.3%，具体方法包括以下步骤：（1）样品配制：供试品溶液制备：精密称取供试品10mg，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得；对照品溶液制备：精密称取保护氨基酸对映异构体，用稀释剂溶解并稀释成浓度为0.03mgml的溶液，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1ml，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得；灵敏度溶液制备：精密量取对照品溶液3ml，置10ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得；系统适用性溶液制备：精密称取供试品10mg，置20ml量瓶中，加入对照品贮备液1ml，溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；所述稀释剂为无水乙醇、正己烷、三氟乙酸的混合溶液，其中无水乙醇、正己烷、三氟乙酸的体积比为60:40:0.1；（2）色谱条件设置：色谱柱：Cellulose-SZ，柱长25cm，内径4.6mm，膜厚5µm；流动相：以体积比为60:40:0.1的无水乙醇-正己烷-三氟乙酸为流动相A，正己烷为流动相B按照下表进行梯度洗脱； 时间min 流动相A% 流动相B% 0 20 80 12 20 80 12.1 100 0 18 100 0 18.1 20 80 柱温：30~40℃；流速：0.3~1.0mlmin；进样体积：1~10µl；检测波长：260~270nm；（3）检测和计算：精密量取系统适用性溶液，灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；通过外标法计算主峰和对映异构体的峰面积。
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权利要求：
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