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申请/专利权人：江苏凯基生物技术股份有限公司

摘要：本发明公开了蛋白纯化技术领域的一种重组人IL‑3包涵体纯化复性方法，包括：（1）收集大肠杆菌表达的人IL‑3包涵体；（2）使用缓冲液D和缓冲液E洗涤人IL‑3包涵体；（3）用缓冲液F溶解人IL‑3包涵体蛋白，获得包含裂解蛋白的包涵体变性液；（4）使用缓冲液G平衡镍柱，将包涵体变性液上样，使用缓冲液H洗杂，使用缓冲液I洗脱人IL‑3蛋白；（5）将洗脱得到的人IL‑3蛋白使用缓冲液A、缓冲液B与缓冲液J进行透析复性，得到复性的重组人IL‑3蛋白。本发明提供的方法使得到的蛋白纯度有较大提升，多步复性进一步提高复性后活率。

主权项：1.一种重组人IL-3包涵体纯化复性方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）收集大肠杆菌表达的人IL-3包涵体；（2）使用缓冲液D和缓冲液E洗涤人IL-3包涵体；（3）用缓冲液F溶解人IL-3包涵体蛋白，获得包含裂解蛋白的包涵体变性液；（4）使用缓冲液G平衡镍柱，将包涵体变性液上样，使用缓冲液H洗杂，使用缓冲液I洗脱人IL-3蛋白；（5）将洗脱得到的人IL-3蛋白使用缓冲液A、缓冲液B与缓冲液J进行透析复性，得到复性的重组人IL-3蛋白；其中，缓冲液D：90~110mmolLTris，0.9~1.1VV%TritonX-114，90~110mmolLNaCl，且pH为7.8~8.2；缓冲液E：90~110mmolLTris，45~55mmolLNaCl，且pH为7.8~8.2；缓冲液F：45~55mmolLTris，5.5~6.5molL盐酸胍，且pH为7.8~8.2；缓冲液G：45~55mmolLTris，5.5~6.5molL尿素，且pH为7.8~8.2；缓冲液H：45~55mmolLTris，5.5~6.5molL尿素，18~22mmolL咪唑，且pH为7.8~8.2；缓冲液I：45~55mmolLTris，5.5~6.5molL尿素，230~270mmolL咪唑，且pH为7.8~8.2；缓冲液A：0.3~0.7molL尿素，0.45~0.55molL精氨酸，1.9~2.1mmolLGSH，0.35~0.45mmolLGSSH，130~170mmolLNaCl，45~55mmolLTris，且pH为7.8~8.2；缓冲液B：0.3~0.7molL尿素，0.15~0.25molL精氨酸，1.9~2.1mmolLGSH，0.35~0.45mmolLGSSH，130~170mmolLNaCl，45~55mmolLTris，且pH为7.8~8.2；缓冲液J采用PBS缓冲液：132~142mmolLNaCl，2.5~2.9mmolLKCl，9~11mmolLNa2HPO4，1.7~1.9mmolLKH2PO4，且pH为7.2~7.6。

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