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一种脑膜瘤多组织学提取方法及应用 

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申请/专利权人:浙江工业大学;中国科学院基础医学与肿瘤研究所(筹)

摘要:本发明属于脑膜瘤检测技术领域,具体涉及一种脑膜瘤多组织学提取方法及应用。根据配对脑膜瘤样本包括肿瘤、正常组织和病变组织,其生物学特性存在显著差异,正常组织和病变组织质地较致密,肿瘤组织又很粘连,他们的解离、制备条件不同,针对不同样本类型,采用不同的提取方法。加入了除去肿瘤的配对正常脑膜和病变脑膜进行不同组织的提取和制备,用于丰富了组织类型;根据不同组织有不同或者最适的DNA、RNA、蛋白等的制备条件。本申请所采用的脑膜瘤单细胞解离用的酶体系,可以得到质量较好的活率高,数量多的单细胞。

主权项:1.一种脑膜瘤多组织学提取方法,其特征在于,包括以下组织学的提取:1脑膜瘤样本的DNA提取DNA采用有机溶剂提取法,首先将样本组织剪碎后加入蛋白酶K消化过夜后使用DNA提取液,抽提离心后,吸取上层水相即可进行后续操作;2脑膜瘤样本的Bulk-RNA提取脑膜瘤样本和所用的研磨设备需要液氮预冷,在液氮条件下研磨;采用有机溶剂提取法;3脑膜瘤单细胞悬液的制备将组织剪成小块,接着加入酶解离液,水浴金属浴,37℃解离;中止后过滤,细胞重悬;所述的酶解离液包括:CollagenaseIV,CollagenaseⅠ,DNaseⅠ;4脑膜瘤样本的Bulk-蛋白提取将组织剪成小块后放入预冷的研钵中研磨成粉末状态,加入LysisBuffer,cocktail蛋白酶抑制剂,DTT,涡旋混匀后静置;上清液中加入DTT,37℃水浴;然后再加入TAM反应;再加入冷丙酮,沉淀,弃上清后涡旋点离,取上清;即得。

全文数据:

权利要求:

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