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申请/专利权人：川北医学院
摘要：本发明属于核酸适配体的筛选和应用技术领域，具体涉及一种广谱型吡咯里西啶类生物碱的核酸适配体、筛选方法及应用，主要包括以下步骤：首先是准备DNA文库，然后进行DNA文库的固定、靶标筛选分离、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，以及DNA文库的扩增，DNA的收集，高通量测序和亲和力的验证，并且经过该筛选方法得到的适配体可以与多种吡咯里西啶类生物碱有较高的亲和力，可以应用于检测吡咯里西啶碱的浓度，并且适配体结构稳定，易于合成，易于修饰，具有广泛的应用前景。
主权项：1.一种广谱型吡咯里西啶类生物碱的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将随机ssDNA文库和cDNA-bio进行杂交退火，孵育冷却；取链霉亲和素琼脂糖珠置于色谱柱中，并清洗平衡柱中环境；将随机ssDNA文库与链霉亲和素琼脂糖珠混合以进行随机ssDNA的固定，重复洗脱，收集洗脱液A；继续洗脱，收集最后一次洗脱的洗脱液B；S2：配制靶标溶液和反筛靶标溶液，取反筛靶标溶液过S1色谱柱洗脱，收集洗脱液D，然后取靶标溶液进行洗脱，收集洗脱液C；洗脱结束进行清洗，收集最后一次洗脱的洗脱液E，进行超滤离心浓缩；将洗脱液A、B、C、D、E进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，得到聚丙烯酰胺凝胶电泳结果；S3：使用PCR对S2中洗脱液C中的所有DNA进行扩增，然后将PCR产物与含有链霉亲和素琼脂糖珠的色谱柱中洗涤，用碱洗脱，得到ssDNA洗脱液，离心浓缩得ssDNA文库，采用超微量核酸蛋白检测得到ssDNA文库浓度；S4：将S3得到的ssDNA文库进行高通量测序，确定核酸适配体序列。
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权利要求：
百度查询： 川北医学院 一种广谱型吡咯里西啶碱的核酸适配体筛选方法及应用
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