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申请/专利权人：武汉科技大学
摘要：本发明涉及生物医药技术领域，提出了一种PTOV1蛋白单克隆抗体的制备方法和应用，制备方法包括以下步骤：S1，扩增PTOV1基因的全长外显子序列，使用连接酶将扩增后的PTOV1基因插入载体获得重组质粒，然后将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞中，获得阳性菌；S2，将阳性菌接入培养基中振荡培养，经过诱导表达后提取上清液，纯化后获得纯化的PTOV1抗原；S3，将纯化的PTOV1抗原免疫动物，制备脾细胞悬液，提取RNA并反转录获得cDNA，然后PCR扩增抗体重链和轻链可变区序列；S4，将PCR产物插入噬菌体展示载体，转化大肠杆菌感受态细胞获得重组质粒；S5，加入辅助噬菌体感染重组质粒，然后加入纯化的PTOV1抗原蛋白进行亲和性筛选，得到亲和力高的阳性噬菌体；S6，将筛选的阳性噬菌体序列插入酶切的质粒，鉴定测序后转染至293T细胞生产PTOV1蛋白单克隆抗体。本发明基于噬菌体展示技术，能够快速、准确制备单一的PTOV1蛋白单克隆抗体，有利于其作为相关癌症生物标志物或提供科学研究之需要，为结直肠癌治疗提供新的靶点。
主权项：1.一种PTOV1蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1，扩增PTOV1基因的全长外显子序列，使用连接酶将扩增后的PTOV1基因插入载体获得重组质粒，然后将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞中，获得阳性菌；S2，将步骤S1的阳性菌接入培养基中振荡培养，经过诱导表达后提取上清液，纯化后获得纯化的PTOV1抗原；S3，将步骤S2纯化的PTOV1抗原免疫动物，制备脾细胞悬液，提取RNA并反转录获得cDNA，然后PCR扩增抗体重链和轻链可变区序列；S4，将步骤S3的PCR产物插入噬菌体展示载体，转化大肠杆菌感受态细胞获得重组质粒；S5，加入辅助噬菌体感染步骤S4的重组质粒，然后加入步骤S2纯化的PTOV1抗原蛋白进行亲和性筛选，得到亲和力高的阳性噬菌体；S6，将筛选的阳性噬菌体序列插入酶切的质粒，鉴定测序后转染至293T细胞生产PTOV1蛋白单克隆抗体。
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百度查询： 武汉科技大学 一种PTOV1蛋白单克隆抗体的制备及应用
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