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申请/专利权人:西部(重庆)科学城种质创制大科学中心
摘要:本发明公开了一种基于RNA感应的靶基因特定编辑形式富集系统,利用腺苷脱氨酶ADAR介导的RNA编辑将靶基因mRNA的检测和报告基因的翻译结合,并利用CRISPRCas9;primeediting;baseediting系统对靶基因进行编辑。通过报告基因的表达水平变化,对含有靶基因特定编辑形式的细胞进行富集。本发明可以在不同生物体中以简单、通用和可推广的方式发挥作用,能够有效的对靶基因的特定编辑形式进行富集,将为基因组编辑技术的规模化应用和新型基因编辑工具的开发以及基因功能研究奠定坚实基础,具有广泛的应用前景。
主权项:1.一种基于RNA感应系统的靶基因特定编辑形式富集方法,其特征在于,将一个或多个不同的RNA感应系统导入宿主进行表达,所述RNA感应系统的基本结构如式1所示:式15’X-A-mut-sesRNA-B-Y3’其中,X为内参基因,A为自剪接肽1,mut-sesRNA为含有UAG密码子的用于感应trgRNA存在的RNA序列,所述trgRNA由目标靶基因特定编辑形式所编码,B为自剪接肽2,Y为报告基因;其中,内参基因的翻译不受RNA感应影响,自剪接肽用于释放内参基因和报告基因,当靶基因未发生基因编辑时,宿主细胞内不存在可以与mut-sesRNA匹配的trgRNA,故无法招募ADAR,报告基因无法翻译;当靶基因发生特定编辑形式的基因编辑时,宿主细胞内存在可以与mut-sesRNA匹配的trgRNA,故招募ADAR使mut-sesRNA中的UAG密码子变为UIG密码子,令报告基因正常翻译,进而通过报告基因的表达水平变化,对含有靶基因特定编辑形式的细胞进行富集。
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