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申请/专利权人:东莞市东阳光冬虫夏草研发有限公司;宜昌山城水都冬虫夏草有限公司
摘要:本发明提供了一种鉴定粉拟青霉的特异性引物、试剂盒、方法及其应用。本发明适用于检测或辅助检测待测样品是否含有粉拟青霉,鉴定或辅助鉴定待测样品是否为粉拟青霉。本发明提供的特异性引物对通过PCR技术可以快速、准确、灵敏地实现上述应用,且引物特异性强,准确度高,扩增效果好,重复性好,耐受性好,适宜推广应用,能鉴别粉拟青霉与其他品种的拟青霉,也能用于属间鉴别。
主权项:1.一种鉴定粉拟青霉菌的特异性引物,其特征在于,其序列如下:NF154:5’-CCCAAACTCTGTATTCTC-3’;NR428:5’-GGCCGGCGGTATACAG-3’;所述鉴定粉拟青霉菌的方法包括:a)提取待测样品的基因组DNA;b)利用所述特异性引物对步骤a)中的基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物;所述的鉴定粉拟青霉菌的方法的PCR扩增体系:PCRMix12.5μL,10μmolL的正反向引物各0.75μL-1μL,DNA模板量为0.0591ng-236.4ng,ddH2O补足至25μL;所述的鉴定粉拟青霉菌的方法的PCR扩增条件为:94℃预变性3min;94℃变性15sec-45sec,49℃-58℃退火15sec–45sec,72℃延伸10sec,25-35个循环;72℃延伸5min;c)利用步骤b)中获得的扩增产物鉴定所述待测样品;所述的鉴定粉拟青霉菌的方法还包括对获得的扩增产物琼脂糖凝胶电泳方法进行鉴定;琼脂糖凝胶电泳方法:PCR产物5μL,电压120V,时间30min;鉴定粉拟青霉菌的特征在于,可以获得大小为200-300bp唯一条带。
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