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申请/专利权人：浙江工业大学
摘要：本发明公开了一种化学‑生物级联合成L‑草铵膦的方法及突变体，以甲基亚磷酸二乙酯和丙烯酸加成反应合成3‑甲基乙氧基膦酰基丙酸乙酯，然后将3‑甲基乙氧基膦酰基丙酸乙酯与乙醇钠缩合反应后，再与草酸二乙酯水解合成2‑羰基‑4‑羟基甲基膦酰基丁酸，最后采用草铵膦脱氢酶与醇脱氢酶共表达湿菌体或草铵膦脱氢酶突变体与醇脱氢酶共表达湿菌体为生物催化剂合成L‑草铵膦，解决了现有L‑草铵膦合成繁锁，不对称胺化还原活性不高和稳定性较差的问题。本发明工艺路线绿色、简单、温和，避免了合成D,L‑草铵膦所用剧毒氰化物，三废产生量较D,L‑草铵膦减少50％以上。本发明生物催化步骤转化率达到100％，无底物残留，产物ee值大于99％。
主权项：1.一种合成L-草铵膦的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：以含草铵膦脱氢酶编码基因与醇脱氢酶编码基因的共表达重组大肠杆菌工程菌经发酵培养获得的湿菌体或含草铵膦脱氢酶突变体的编码基因和醇脱氢酶编码基因共表达重组大肠杆菌工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以2-羰基-4-羟基甲基膦酰基丁酸为底物，加入异丙醇、NAD+，以pH6-8的缓冲液为反应介质构成反应体系，在40-60℃、100-200rpm条件下进行转化反应，反应液分离纯化，获得L-草铵膦；所述草铵膦脱氢酶突变体是将氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的草铵膦脱氢酶的第73位或第91位进行单独突变或双突变获得的。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江工业大学 一种化学-生物级联合成L-草铵膦的方法及突变体
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