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申请/专利权人：通用医疗公司
摘要：本申请涉及多重引导RNA。用于任选地在哺乳动物细胞中将高活性CRISPR引导RNAgRNA从RNA聚合酶II和III启动子进行多重表达的方法和构建体。本发明至少部分地基于Csy4的发现，Csy4是一种内切核糖核酸酶，该内切核糖核酸酶识别短RNA发夹序列，可以用于切下在单个较长RNA转录物上编码的多功能gRNA产生自RNApolII或III启动子，在该较长RNA转录物中的各个gRNA由Csy4切割位点隔开。
主权项：1.一种脱氧核糖核酸DNA分子，包括：编码crRNA的多个序列，其中每个crRNA侧翼是至少一个Csy4切割序列，该Csy4切割序列由序列GTTCACTGCCGTATAGGCAGSEQIDNO:1组成；和编码tracrRNA的序列；其中该crRNA序列为：X17-20GTTTTAGAGCTAGAAASEQIDNO:15；以及该tracrRNA序列为：TAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCSEQIDNO:16；其中X17-20是与靶序列的17-20个连续核苷酸的互补链互补的序列。
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