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申请/专利权人:东南大学
摘要:本发明公开了一种采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条及其制备方法,属于临床诊断技术领域。本发明采用普鲁士蓝纳米酶替代干化学试纸条中普遍使用的天然辣根过氧化物酶。人工合成的普鲁士蓝纳米材料具有催化过氧化物与底物反应的特性。相较天然酶,人工酶具有易储存、制备方便、可工业化大批量生产,成本低、热稳定性好等优势,能满足临床应用的需求。
主权项:1.一种采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条的制备方法,其特征在于:(1)将普鲁士蓝纳米酶、黏附剂、葡萄糖氧化酶、过氧化物底物加入缓冲液中,制备成膜处理液(Ⅰ),使膜处理液(Ⅰ)吸附在反应膜上,烘干,得到含有普鲁士蓝纳米酶的反应膜,将扩散膜、滤血膜、反应膜由上至下依次叠加,得到采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条;或者2将普鲁士蓝纳米酶、黏附剂加入缓冲液中,制备成膜处理液(Ⅱ),使膜处理液(Ⅱ)吸附在滤血膜上;然后将葡萄糖氧化酶、过氧化物底物、黏附剂加入缓冲液中,制备成膜处理液(Ⅲ),使膜处理液(Ⅲ)吸附在反应膜上,将扩散膜、滤血膜、反应膜由上至下依次叠加,得到采用普鲁士蓝纳米酶的干式葡萄糖试纸条;(1)、2中,所述普鲁士蓝纳米酶的制备方法如下:(S1)将PVP、FeCl3•6H2O分散于超纯水中,60℃水浴加热搅拌混合,所述PVP、FeCl3•6H2O的摩尔比为10:(0.05~0.15),所述PVP在超纯水中的含量为0.1-0.125mmolmL;(S2)将K4[FeCN6]•3H2O按0.003~0.006mmolmL分散于超纯水中,(S3)利用双道微流注射泵,将K4[FeCN6]•3H2O溶液滴加至步骤(S1)制备的PVP、FeCl3•6H2O溶液中,滴加速率20~60mLh,滴加结束后,60℃恒温水浴条件下继续搅拌,反应结束后关闭水浴锅电源,将反应液的温度缓慢降至室温;(S4)用MILLPORETTF系统切向流过滤掉未反应的PVP以及离子,最后用0.22μm的滤膜过滤掉团聚体,得到普鲁士蓝纳米酶;(1)、2中,所述普鲁士蓝纳米酶的粒径为50~150nm;所述普鲁士蓝纳米酶在缓冲液中的浓度为0.5~1mgmL;(1)、2中,所述的缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,所述缓冲液的pH为3.5-5.0;(1)、2中,所述的膜处理液(Ⅰ)、膜处理液(Ⅱ)、膜处理液(Ⅲ)中还含有表面活性剂,所述的表面活性剂为TritonX-100,其中,所述TritonX-100的体积分数为0.02%~0.1%;(1)、2中,所述的膜处理液(Ⅰ)、膜处理液(Ⅱ)、膜处理液(Ⅲ)中还含有防腐剂,所述的防腐剂为苯甲酸钠,所述防腐剂的含量为0.5~1gL;所述膜处理液(Ⅰ)、膜处理液(Ⅱ)中还含有BSA,所述BSA的浓度为20~30gL;所述膜处理液(Ⅰ)、膜处理液(Ⅱ)中还含有EDTA,所述EDTA的浓度为0.5~1.5gL;(1)、2中,所述的黏附剂为甲基乙烯基醚-马来酸酐共聚物,所述黏附剂的体积分数为0.5%~1%;(1)、2中,所述过氧化物底物为:MAOS+4-AAP,所述过氧化物底物在缓冲液中的含量为4~10gL,其中,MAOS与4-AAP的摩尔比为(1-3):1;(1)、2中,所述葡萄糖氧化酶浓度为:250-400KUL;(1)、2中,反应膜为不对称结构的聚醚砜膜,滤血膜为玻纤膜,扩散膜为聚酯膜。
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