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龙图腾网恭喜中国海洋大学申请的专利一种缺氧响应的转基因斑马鱼模型的构建方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116162652B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-07发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310203912.8，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权一种缺氧响应的转基因斑马鱼模型的构建方法及应用是由卢玲;刘云章;郑栋栋;唐艳飞;李筠设计研发完成，并于2023-03-03向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种缺氧响应的转基因斑马鱼模型的构建方法及应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种缺氧响应的转基因斑马鱼模型的构建方法，首先在缺氧响应元件HRE序列后组装sv40mp启动子，克隆至携带绿色荧光蛋白GFP的pT2AL200R150G质粒中，然后将此重组质粒和转座酶mRNA显微注射入斑马鱼胚胎，通过Tol2转座子技术，将重组序列插入F0代斑马鱼的基因组中；F0代养至成鱼，与野生型斑马鱼杂交产生F1代，F1代再次与野生型杂交，产生单拷贝型转基因斑马鱼F2代，F2代同胞斑马鱼雌雄自交，筛选出可以稳定遗传的F3代缺氧响应的转基因斑马鱼TgHRE‑sv40mp:GFP。本发明所构建的转基因斑马鱼TgHRE‑sv40mp:GFP可作为一种简捷高效的缺氧响应模型，用于缺氧相关领域的生物学研究，以及用于筛选HIF‑1α的分子靶向药物，为抗肿瘤药物研发提供活体动物筛选模型。

本发明授权一种缺氧响应的转基因斑马鱼模型的构建方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种缺氧响应的转基因斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）体外扩增插入片段：合成引物，以质粒p2.1为模板，通过高保真PCR技术体外扩增缺氧响应元件HRE和SV40启动子，得到HRE-sv40mp序列；所述HRE为人烯醇化酶启动子中的HRE序列；所述引物序列如下：正向引物序列：5'-TAACATACCCCGGGAGCATGCAGGGCCGGACGTGG-3'；反向引物序列：5'-CGCGGATCCTTTACCAACAGTACCGG-3'；（2）构建重组质粒：将带绿色荧光蛋白pT2AL200R150G质粒和步骤（1）扩增得到的HRE-sv40mp序列经过酶切、连接、转化大肠杆菌，构建重组质粒pT2AL200R150GHRE-sv40mp-GFP；（3）胚胎显微注射：收集斑马鱼受精卵，显微注射入转座酶mRNA和重组质粒pT2AL200R150GHRE-sv40mp-GFP，恒温孵育；（4）筛选转基因品系：将步骤（3）孵育的胚胎饲养至性成熟，标记为F0代斑马鱼；F0代与野生型杂交，挑选可产生绿色荧光的胚胎，继续饲养至性成熟，标记为F1代；F1代再次与野生型杂交，挑选可产生绿色荧光的胚胎，继续饲养至性成熟，标记为F2代；F2代同胞斑马鱼雌雄自交，挑选可产生绿色荧光的胚胎，继续饲养至性成熟，标记为F3代，即为缺氧响应的转基因斑马鱼模型。

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