恭喜汕尾市农业科学院;汕尾市动物疫病预防控制中心刘诚刚获国家专利权
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龙图腾网恭喜汕尾市农业科学院;汕尾市动物疫病预防控制中心申请的专利敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系及其制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119082207B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-04发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411440346.3,技术领域涉及:C12N15/867;该发明授权敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系及其制备方法是由刘诚刚;张伟平设计研发完成,并于2024-10-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系及其制备方法在说明书摘要公布了:本申请属于生物领域,公开了一种敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系的制备方法,包括如下步骤:步骤1:制备连接有TLR15guideRNA的慢病毒;步骤2:采用慢病毒感染LMH细胞,筛选成功感染慢病毒的LMH细胞;步骤3:将步骤2得到的LMH细胞分离成为单细胞并加入到单细胞培养基中进行培养,将培养后得到的细胞进行鉴定,得到敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系。本发明通过慢病毒转染法转染LMH细胞,将转染后的LMH细胞分离成为单个细胞后采用特制的单细胞培养基进行培养,可以得到敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系,有效的克服了传统方法无法成功制备敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系的难题。同时,本发明还提供了一种敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系。
本发明授权敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系及其制备方法在权利要求书中公布了:1.一种敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1:制备连接有TLR15guideRNA的慢病毒;步骤2:采用慢病毒感染LMH细胞,筛选成功感染慢病毒的LMH细胞;步骤3:将步骤2得到的LMH细胞分离成为单细胞并加入到单细胞培养基中进行培养,将培养后得到的细胞进行鉴定,得到敲除TLR15基因的单克隆LMH细胞系;所述单细胞培养基包括含有18~22wt%FBS的DMEMF12培养基和细胞上清液;所述单细胞培养基中还含有终浓度为8~12µgmL的转铁蛋白、终浓度为20~30ngmL的生长因子以及双抗;所述细胞上清液的制备方法为:采用含8~12wt%FBS的DMEMF12培养基培养鸡肝癌细胞,培养一段时间后收集上清液即可得到所述细胞上清液;所述TLR15guideRNA的序列如SEQIDNO.1所示;所述生长因子为表皮生长因子、肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子中的一种或多种组合。
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