恭喜华南农业大学黄晓获国家专利权
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龙图腾网恭喜华南农业大学申请的专利一种基于烟草瞬时表达体系快速鉴定植物细胞自噬相关蛋白的方法和试剂盒获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115825444B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210910335.1,技术领域涉及:G01N33/68;该发明授权一种基于烟草瞬时表达体系快速鉴定植物细胞自噬相关蛋白的方法和试剂盒是由黄晓;谭惠琼;罗娜;李发强设计研发完成,并于2022-07-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于烟草瞬时表达体系快速鉴定植物细胞自噬相关蛋白的方法和试剂盒在说明书摘要公布了:本发明通过一种基于烟草瞬时表达体系快速鉴定植物细胞自噬相关蛋白的方法和试剂盒。构建表达GFP荧光标记的ATG8a蛋白的农杆菌和表达mCherry荧光标记的待测蛋白的农杆菌,将所述农杆菌配置成悬浮液,混合后注入烟草叶片背面,培养烟草至有GFP荧光标记的ATG8a蛋白和mCherry荧光标记的待测蛋白表达;再注入刀豆素A,取烟草叶片在无菌湿润滤纸中培养,观测烟草叶片细胞液泡中待测蛋白表达情况。本方法用于在较短时间内达到精确、有效地鉴定植物细胞自噬相关蛋白,且鉴定出拟南芥的内甘露糖苷酶为自噬蛋白,所述拟南芥的内甘露糖苷酶的TAIR数据库编号为AT1G09010。
本发明授权一种基于烟草瞬时表达体系快速鉴定植物细胞自噬相关蛋白的方法和试剂盒在权利要求书中公布了:1.一种鉴定植物细胞自噬相关蛋白的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:分别构建表达被荧光标记的ATG8a蛋白的工程菌和表达被荧光标记的待测蛋白的工程菌,表达所述ATG8a蛋白的基因的NCBI登录号为:NM_118319.4,引物序列为:AATTGATGGCTAAGAGTTCCTTC,GTGGATCCTCATCCAAAAGTGTTCTCT;S2:将步骤S1所述工程菌分别悬浮于悬浮液中,得到表达被荧光标记的ATG8a蛋白的工程菌悬浮液和表达被荧光标记的待测蛋白的工程菌悬浮液,所述悬浮液含有MgCl2、乙酰丁香酮和2-吗啉乙磺酸;S3:将步骤S2得到的表达被荧光标记的ATG8a蛋白的工程菌悬浮液和表达被荧光标记的待测蛋白的工程菌悬浮液混合,注入烟草叶片背面,形成水渍状区域,标记烟草叶片的水渍状区域,培养烟草至有被荧光标记的ATG8a蛋白和被荧光标记的待测蛋白表达;所述表达被荧光标记的ATG8a蛋白的工程菌悬浮液和表达被荧光标记的待测蛋白的工程菌悬浮液的体积比为0.8~1.2:1;S4:步骤S3有被荧光标记的ATG8a蛋白和被荧光标记的待测蛋白表达后,在烟草叶片背面水渍状区域注入刀豆素A,取烟草叶片在无菌湿润滤纸中培养,观测烟草叶片细胞液泡中待测蛋白表达情况,烟草叶片细胞的液泡中检测到待测蛋白表达,表明待测蛋白与植物细胞自噬相关途径相关。
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