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北京大学徐成冉获国家专利权

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龙图腾网获悉北京大学申请的专利一种将人多能干细胞诱导分化为胰腺前体细胞的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118185858B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410431275.4,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权一种将人多能干细胞诱导分化为胰腺前体细胞的方法是由徐成冉;于欣欣;王信设计研发完成,并于2024-04-10向国家知识产权局提交的专利申请。

一种将人多能干细胞诱导分化为胰腺前体细胞的方法在说明书摘要公布了:本发明涉及一种将人多能干细胞诱导分化为胰腺前体细胞的方法,相比于传统的诱导分化流程,本发明的技术方案不仅将耗时超过30天、需要经过6‑7个阶段的过程缩短至只需19天的5个阶段,还能显著提升β样细胞的比例至60%‑70%,有效地改善了糖尿病小鼠模型中的高血糖症状,并且对移植物进行单细胞转录组检测,发现其中可检测到60%‑70%的β细胞,相较于移植前细胞状态更成熟。此外本发明还公开了一种评估细胞质量的方法,用于衡量体外诱导细胞的质量。这一方法不再依赖于传统的基于少数特定基因和蛋白表达的检测,而是利用单细胞组学技术,基于“基因共表达网络三模块”来定性和评估诱导细胞的特性及其分化效率,为该领域提供了全新的评估标准。

本发明授权一种将人多能干细胞诱导分化为胰腺前体细胞的方法在权利要求书中公布了:1.一种将人多能干细胞诱导分化为胰腺前体细胞的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤(S:S1:同时激活TGF-βNodal通路和WNT通路;S2:同时激活FGF通路、TGF-βNodal通路、WNT通路和添加终浓度0.25mM维生素C;S3:同时激活FGF通路、抑制SHH通路、激活Retinoicacid(RA)通路、抑制BMP通路、激活PKC和添加终浓度0.25mM维生素C;S4:同时抑制SHH通路、激活Retinoicacid(RA)通路、抑制BMP通路、抑制TGF-βRI激酶和添加终浓度1μM甲状腺素T3;S5:同时抑制BMP通路、激活Notch通路、抑制TGF-βRI激酶和添加终浓度1μM甲状腺素T3;S1-S5各步骤具体操作为:将人多能干细胞培养在添加终浓度10μMY-27632的mTeSR1多能干细胞培养基中,24小时后起始诱导分化:S1历时2天:在培养基中添加终浓度100ngmLActivinA和CHIR-99021,CHIR-99021第一天使用终浓度3μM,CHIR-99021第二天使用终浓度0.3μM;S2历时4天:在培养基中添加终浓度50ngmLFGF10、10ngmLActivinA、0.3μMCHIR-99021和0.25mM维生素C;S3历时3天:在培养基中添加终浓度2ngmLFGF10、0.25μMSANT-1、1μMRA、100nMLDN-193189、200nMTPPB和0.25mM维生素C;S4历时3天:在培养基中添加终浓度0.25μMSANT-1、0.05μMRA、100nMLDN-193189、10μMALK5iII和1μM甲状腺素T3;S5历时7天:在培养基中添加终浓度100nMLDN-193189、100nMGSIXX、10μMALK5iII和1μM甲状腺素T3;其中,S1和S2中所用的基础培养基为MCDB131培养基,额外添加终浓度1.5gLNaHCO3,1×GlutaMAX,10mMD-葡萄糖,0.5%牛血清白蛋白和100UmL青霉素-链霉素;S3中所用的基础培养基为:MCDB131培养基,额外添加终浓度2.5gLNaHCO3,1×GlutaMAX,10mMD-葡萄糖,2%牛血清白蛋白,0.5×ITS-X和100UmL青霉素-链霉素;S4-S5中所用的基础培养基为:MCDB131培养基,额外添加终浓度1.5gLNaHCO3,1×GlutaMAX,20mMD-葡萄糖,2%牛血清白蛋白,0.5×ITS-X,10μMZnSO4,10μgmL肝素和100UmL青霉素-链霉素。

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